研究目的關(guān)節(jié)軟骨缺乏自我再生和愈合能力,軟骨病損后的修復(fù)問(wèn)題仍是臨床上的一項(xiàng)重大難題。再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展帶來(lái)了治療軟骨病損的希望,在一些國(guó)家和地區(qū)已經(jīng)開(kāi)展使用干細(xì)胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的臨床試驗(yàn)。目前這些研究仍處于摸索、試錯(cuò)階段,為了提高軟骨修復(fù)效果,眾多研究者開(kāi)始把重心投在能夠優(yōu)化、改善干細(xì)胞治療功能的策略上,包括干細(xì)胞的來(lái)源、預(yù)處理以及輔助材料上。本研究目的旨在評(píng)價(jià)IPFP-SCs作為干細(xì)胞來(lái)源用于修復(fù)軟骨的可行性,并從PRP的優(yōu)化選擇和細(xì)胞分離途徑兩個(gè)方面分別進(jìn)行研究,探討IPFP-SCs修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的方法,為臨床應(yīng)用提供思路和參考。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果本實(shí)驗(yàn)研究由三部分組成。第一部分,使用酶消化法提取兔IPFP-SCs并進(jìn)行體外培養(yǎng)、表型鑒定以及三向分化能力檢測(cè);使用兩次離心法制備含白細(xì)胞PRP（L-PRP）與乏白細(xì)胞PRP（P-PRP）,通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)分析比較兩種不同形式PRP對(duì)IPFP-SCs的影響,如細(xì)胞增殖速率、細(xì)胞表型以及基因表達(dá),并檢測(cè)L-PRP與P-PRP對(duì)IPFP-SCs的成軟骨能力之間的差異。第二部分,使用無(wú)酶非消化的方法分離、提取、培養(yǎng)IPFP-SCs,與傳統(tǒng)酶消化法獲取的IP... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：113 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

軟骨病損的治療途徑

ESCs:胚胎干細(xì)胞；iPSCs:誘導(dǎo)多能干細(xì)胞；CSPCs:軟骨源干/祖細(xì)胞ADSCs的應(yīng)用策略主要從幾個(gè)方面去考慮：應(yīng)用形式（SVF或擴(kuò)增的ADSCs）、細(xì)胞來(lái)源的選擇、誘導(dǎo)分化技術(shù)、細(xì)胞遞送的輔助物等幾個(gè)方面，如圖2所示。在應(yīng)用形式的選擇上，雖然SVF中ADSCs只是其中的成分之一，不能像擴(kuò)增培養(yǎng)的ADSCs可以高效地達(dá)到一定的高劑量，但由于SVF已經(jīng)在一些國(guó)家和地區(qū)的監(jiān)管部門批準(zhǔn)使用，而ADSCs仍被廣泛認(rèn)為是需要嚴(yán)格臨床試驗(yàn)和監(jiān)管批準(zhǔn)的藥品[6]，所以目前臨床試驗(yàn)中大多數(shù)還是以SVF形式提供ADSCs。除了監(jiān)管問(wèn)題的優(yōu)勢(shì)，SVF的遞送可以在當(dāng)天同一手術(shù)室作為單一手術(shù)完成，這樣避免耗時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程并減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。不過(guò)很多學(xué)者還是認(rèn)為經(jīng)擴(kuò)增培養(yǎng)的ADSCs除了能夠便于提供劑量上的優(yōu)勢(shì)

圖 1-1：酶消化法分離提取 IPFP-SCs 示意圖。通過(guò)手術(shù)方法切取兔 IPFP，剪碎后加入0.1%I 型膠原酶溶液中，恒溫振蕩消化后經(jīng)過(guò)過(guò)濾、離心獲取 SVF，再接種到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（2）IPFP-SCs 的表征①細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：使用倒置光學(xué)顯微鏡觀察 IPFP-SCs 的形態(tài)。在 6 孔

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Application of platelet-rich plasma with stem cells in bone and periodontal tissue engineering[J]. Gabriela Fernandes,Shuying Yang.  Bone Research. 2016(04)



本文編號(hào)：2970950