研究目的關(guān)節(jié)軟骨缺乏自我再生和愈合能力,軟骨病損后的修復問題仍是臨床上的一項重大難題。再生醫(yī)學的發(fā)展帶來了治療軟骨病損的希望,在一些國家和地區(qū)已經(jīng)開展使用干細胞修復關(guān)節(jié)軟骨的臨床試驗。目前這些研究仍處于摸索、試錯階段,為了提高軟骨修復效果,眾多研究者開始把重心投在能夠優(yōu)化、改善干細胞治療功能的策略上,包括干細胞的來源、預處理以及輔助材料上。本研究目的旨在評價IPFP-SCs作為干細胞來源用于修復軟骨的可行性,并從PRP的優(yōu)化選擇和細胞分離途徑兩個方面分別進行研究,探討IPFP-SCs修復關(guān)節(jié)軟骨的方法,為臨床應(yīng)用提供思路和參考。研究內(nèi)容及結(jié)果本實驗研究由三部分組成。第一部分,使用酶消化法提取兔IPFP-SCs并進行體外培養(yǎng)、表型鑒定以及三向分化能力檢測;使用兩次離心法制備含白細胞PRP（L-PRP）與乏白細胞PRP（P-PRP）,通過體外實驗分析比較兩種不同形式PRP對IPFP-SCs的影響,如細胞增殖速率、細胞表型以及基因表達,并檢測L-PRP與P-PRP對IPFP-SCs的成軟骨能力之間的差異。第二部分,使用無酶非消化的方法分離、提取、培養(yǎng)IPFP-SCs,與傳統(tǒng)酶消化法獲取的IP... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

軟骨病損的治療途徑

ESCs:胚胎干細胞；iPSCs:誘導多能干細胞；CSPCs:軟骨源干/祖細胞ADSCs的應(yīng)用策略主要從幾個方面去考慮：應(yīng)用形式（SVF或擴增的ADSCs）、細胞來源的選擇、誘導分化技術(shù)、細胞遞送的輔助物等幾個方面，如圖2所示。在應(yīng)用形式的選擇上，雖然SVF中ADSCs只是其中的成分之一，不能像擴增培養(yǎng)的ADSCs可以高效地達到一定的高劑量，但由于SVF已經(jīng)在一些國家和地區(qū)的監(jiān)管部門批準使用，而ADSCs仍被廣泛認為是需要嚴格臨床試驗和監(jiān)管批準的藥品[6]，所以目前臨床試驗中大多數(shù)還是以SVF形式提供ADSCs。除了監(jiān)管問題的優(yōu)勢，SVF的遞送可以在當天同一手術(shù)室作為單一手術(shù)完成，這樣避免耗時的細胞培養(yǎng)過程并減少污染的風險。不過很多學者還是認為經(jīng)擴增培養(yǎng)的ADSCs除了能夠便于提供劑量上的優(yōu)勢

圖 1-1：酶消化法分離提取 IPFP-SCs 示意圖。通過手術(shù)方法切取兔 IPFP，剪碎后加入0.1%I 型膠原酶溶液中，恒溫振蕩消化后經(jīng)過過濾、離心獲取 SVF，再接種到培養(yǎng)瓶中進行傳代培養(yǎng)。（2）IPFP-SCs 的表征①細胞形態(tài)學觀察：使用倒置光學顯微鏡觀察 IPFP-SCs 的形態(tài)。在 6 孔

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Application of platelet-rich plasma with stem cells in bone and periodontal tissue engineering[J]. Gabriela Fernandes,Shuying Yang.  Bone Research. 2016(04)



本文編號：2970950