目的:骨癌痛（BCP）是由原發(fā)性骨癌或腫瘤轉(zhuǎn)移引起的疼痛。越來越多的證據(jù)及我們以前的研究表明,沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）參與了BCP的外周致敏和中樞敏化,SIRT1在骨癌疼痛中的潛在機制可能為疼痛治療提供一定的線索。SRT1720是SIRT1選擇性激活劑,本文研究了SRT1720在病理性疼痛中的作用及分子機制。方法:將27只雌性SD大鼠隨機分為Sham組,BCP組和BCP+SRT1720組,BCP組和BCP+SRT1720組通過將MRMT-1大鼠乳腺癌細胞注入到左脛骨中以建立乳腺癌的骨轉(zhuǎn)移疼痛模型,Sham組在相同位置注入相同體積的HBSS。通過脛骨X光片,HE染色觀察BCP組大鼠骨破壞程度,機械痛測試進行驗證。建模12天后,SRT1720組鞘內(nèi)注射SRT1720,Sham組和BCP組注射相同體積的DMSO+生理鹽水（體積比1:1）,各組給藥后0、1、3、5、7、12、18和24 h檢測50%縮足閾值（PWT）;給藥12 h后處死,通過Western Blot、免疫熒光、ELISA等實驗方法檢驗各組相關(guān)蛋白的變化水平;采用TUNEL法檢測BCP模型大鼠細胞凋亡情況。在體外實驗中,... 

【文章來源】： 郝苗苗 湖北科技學(xué)院

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

脛骨內(nèi)注射MRMT-1細胞誘導(dǎo)了BCP大鼠的骨破壞和機械性異常疼痛

212鞘內(nèi)注射SRT1720可降低BCP誘導(dǎo)的脊髓細胞凋亡信號脊髓背角對于處理包括疼痛知覺在內(nèi)的感覺信息至關(guān)重要[32]。因此，我們檢測了骨癌發(fā)生時脊髓背角的變化。組織學(xué)檢查顯示，與Sham組相比，BCP組的脊髓背角炎癥細胞浸潤增加（圖2A）。該結(jié)果表明BCP誘導(dǎo)了脊髓的異常改變。TUNEL測定法旨在檢測凋亡后期階段發(fā)生大量DNA降解的凋亡細胞[33]。Sham組大鼠的脊髓背角顯示很少的TUNEL陽性細胞，而BCP大鼠脊髓背角的TUNEL信號顯著增加（圖2B）。同時，與Sham大鼠相比，BCP大鼠的凋亡相關(guān)因子失調(diào)。BCP降低了抗凋亡因子Bcl-2的表達，增強了促凋亡因子BAX和介導(dǎo)凋亡相關(guān)底物裂解的caspase-3的表達水平（圖2C–E）。這些結(jié)果表明BCP大鼠脊髓中的細胞凋亡被激活。將SRT1720（一種選擇性SIRT1激動劑）鞘內(nèi)注射到BCP大鼠的脊髓中。處理12小時后，檢測其Bcl-2、BAX和caspase-3的表達。結(jié)果表明，SRT1720處理可上調(diào)BCP大鼠脊髓的Bcl-2表達，下調(diào)BAX和caspase-3的表達。這些數(shù)據(jù)表明，SRT1720抑制了BCP大鼠脊髓中的凋亡信號。圖2.SRT1720對脊髓細胞凋亡信號的影響A.HE脊髓染色在Sham大鼠和BCP大鼠中均顯示出炎性細胞浸潤。B.TUNEL法檢測Sham組和BCP組大鼠脊髓背側(cè)凋亡細胞。比例尺=100μm。C.Sham，BCP和BCP+SRT1720大鼠脊髓中BAX蛋白含量的ELISA分析。*p<0.05vsSham組，＃p<0.05vsBCP組。（D,

3 SRT1720 逆轉(zhuǎn) BCP 對 SIRT1 活性的抑制作用 蛋白質(zhì)印跡分析了 Sham 組大鼠，BCP 組大鼠和 BCP+SRT1720 組大鼠的脊髓中 SIRT1 的表達和活性（圖 3）。SIRT1 的活性以 Ser47 處磷酸化的 SIRT1 表達水平表示[34]。如圖 3 所示，BCP 組中總水平和磷酸化的 SIRT1 均降低，而SRT1720 處理恢復(fù)了磷酸化型 SIRT1（pSIRT1）的表達量。BCP+SRT1720 組大鼠中 pSIRT1/SIRT1 的相對值為 1.38±0.06（與 BCP 組相比，p <0.05，圖 3D），表明 SIRT1 活性增加。這些結(jié)果表明，SIRT1 在 BCP 中的表達和活性均降低，而 SRT1720 則激活 SIRT1 的活性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]SIRT1在小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用及其對NF-κBp65-PGC-1α信號通路的影響[J]. 李璐,楊晶,張穎,蔣甘孺,孫京華,李勝開,尹忠誠.  中華腎臟病雜志. 2015 (02)



本文編號：2970643