研究背景我國(guó)老齡化已日益嚴(yán)重,骨類疾病作為老年人群高發(fā)的疾病已引起了醫(yī)學(xué)界的重視。許多研究表明miRNAs調(diào)控骨代謝平衡,參與骨類疾病發(fā)生過程,但miR-223-5p對(duì)成骨分化的調(diào)控作用至今未見報(bào)道。研究目的本研究通過探究miR-223-5p對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化的調(diào)控作用和機(jī)制,為治療骨類疾病提供理論依據(jù)。研究方法1、miR-223-5p對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化的影響（1）MC3T3-E1細(xì)胞分別在完全培養(yǎng)基和成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng),RT-qPCR檢測(cè)誘導(dǎo)前后miR-223-5p、ALP、OCN和Runx2表達(dá),Western Blot檢測(cè)ALP、OCN和Runx2表達(dá)和采用ALP活性檢測(cè)。（2）MC3T3-E1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 miR-223-5p mimics 或 inhibitor,RT-qPCR檢測(cè)過表達(dá)、干擾效率和測(cè)定ALP、OCN和Runx2表達(dá),ALP活性檢測(cè)和茜素紅染色。2、miR-223-5p調(diào)控HDAC2促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化的作用機(jī)制研究（1）生物信息學(xué)及數(shù)據(jù)庫(kù)分析預(yù)測(cè)miR-223-5p的下游靶基因。（2）MC3T3-E1細(xì)胞轉(zhuǎn)染 miR-2... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖４ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞誘導(dǎo)成骨分化０、７、１４ｄ的ＡＬＰ活性??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＡＬＰ?ｉｎ?ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?０＞?７＞?１４?ｄａｙｓ??

的抑制作用增大，ＯＣＮ的表達(dá)水平逐漸升高。??不同濃度的ＣＡＹ１０６８３干擾ＨＤＡＣ２表達(dá)后，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞Ｒｕｎｘ２基因表??達(dá)水平見圖１７。結(jié)果顯示隨著ＣＡＹ１０６８３藥物濃度的升高，ＨＤＡＣ２的表達(dá)逐步??降低，而Ｒｕｎｘ２的表達(dá)逐步升高。０．０１?ｐＭ／Ｌ?ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞??中Ｒｕｎｘ２表達(dá)量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞的１．２１倍；??ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞中Ｒｕｎｘ２表達(dá)量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞的２．２３倍，組間比較兩者有顯著性差異（Ｐ＜０．０５）；?１．０｜ｉＭ／Ｌ??ＣＡＹ１０６８３作用的ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞中Ｒｕｎｘ２表達(dá)量是未被ＣＡＹ１０６８３作用的??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞的２．９５倍，組間比較兩者有顯著性差異（Ｐ＜０．０１）。ＣＡＹ１０６８３??作用后，ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞中Ｒｕｎｘ２的表達(dá)明顯升高，且隨著ＣＡＹ１０６８３藥物濃??度的增大，Ｒｕｎｘ２的表達(dá)逐漸升高，當(dāng)ＣＡＹ１０６８３的濃度為１．０ｐＭ／Ｌ時(shí)，Ｒｕｎｘ２??的表達(dá)水平最高，表明隨著ＣＡＹ１０６８３對(duì)ＨＤＡＣ２的抑制作用増大，Ｒｕｎｘ２的表??達(dá)水平逐漸升高。??圖１８是采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分別檢測(cè)不同濃度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＭＣ３Ｔ３－??Ｅ１細(xì)胞中ＨＤＡＣ２蛋白水平表達(dá)變化

的表達(dá)水平最高，表明隨著ＣＡＹ１０６８３對(duì)ＨＤＡＣ２的抑制作用増大，Ｒｕｎｘ２的表??達(dá)水平逐漸升高。??圖１８是采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分別檢測(cè)不同濃度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＭＣ３Ｔ３－??Ｅ１細(xì)胞中ＨＤＡＣ２蛋白水平表達(dá)變化，以及干擾ＨＤＡＣ２表達(dá)后ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)??胞ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示隨著ＣＡＹ１０６８３藥物濃度的升??高，ＨＤＡＣ２的蛋白表達(dá)量逐步降低，而成骨分化標(biāo)志物ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２??蛋白表達(dá)量逐步升高。??為多方面探宄ＨＤＡＣ２對(duì)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞成骨分化的調(diào)控作用，我們選用??ＨＤＡＣ２白勺特異性抑制齊�。�?ＣＡＹ１０６８３下調(diào)ＨＤＡＣ２的基因和蛋白表達(dá)水平。??ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞不同濃度的ＣＡＹ１０６８３作用下，ＨＤＡＣ２基因和蛋白表達(dá)水平整??體降低，隨著ＣＡＹ１０６８３藥物濃度的增大，ＨＤＡＣ２基因和蛋白表達(dá)水平逐漸降??低，即ＨＤＡＣ２與ＣＡＹ１０６８３呈劑量依賴關(guān)系。隨著ＨＤＡＣ２表達(dá)水平降低，成??骨分化標(biāo)志物ＡＬＰ、ＯＣＮ和Ｒｕｎｘ２基因和蛋白表達(dá)水平逐步升高，與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染??７０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MiRNA對(duì)成骨分化調(diào)控及骨質(zhì)疏松發(fā)生的研究進(jìn)展[J]. 潘虹旭.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2018(01)
[2]miR-34b對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響及相關(guān)機(jī)制[J]. 齊磊.  臨床與病理雜志. 2016(07)
[3]巴戟天水提取物對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中OPG/RANKL表達(dá)的影響[J]. 吳國(guó)志,歐積壯,吳昌新.  海南醫(yī)學(xué). 2016(03)
[4]860例女性PTH、25（OH）D3、CT、骨代謝標(biāo)志物與BMD相關(guān)性[J]. 張萌萌,李亞剛,馬倩倩,高遠(yuǎn),毛未賢,梁斌斌,劉穎.  中國(guó)婦幼保健. 2012(32)
[5]骨代謝標(biāo)志物在多發(fā)性骨髓瘤診治中的應(yīng)用現(xiàn)狀[J]. 王琳,牛愛軍.  實(shí)用醫(yī)藥雜志. 2011(09)
[6]疊加造模后膝關(guān)節(jié)骨密度改變及軟骨基質(zhì)金屬蛋白酶-13的表達(dá)[J]. 賀文楠,蔣振剛,左新成.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2010(06)
[7]骨質(zhì)疏松骨代謝生化指標(biāo)的研究進(jìn)展[J]. 肖恩,孟萍.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2008(03)
[8]基質(zhì)金屬蛋白酶-1、-2與女性年齡、骨轉(zhuǎn)換生化指標(biāo)及骨密度的關(guān)系[J]. 張紅,羅湘杭,謝輝,伍賢平,單鵬飛,曹行之,廖二元.  中華內(nèi)科雜志. 2006(04)
[9]骨骼發(fā)育中的轉(zhuǎn)錄因子Cbfa1[J]. 劉文廣,王洪振,曾憲錄.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2003(01)
[10]尿吡啶啉和脫氧吡啶啉是骨吸收特異性生化標(biāo)志物[J]. 賈成瑤,李萍.  中國(guó)臨床康復(fù). 2002(15)



本文編號(hào)：2968203