目的:椎間盤突出后繼發(fā)的人體自身免疫反應(yīng)和炎性刺激被認(rèn)為是腰椎間盤突出癥患者腰背部及下肢疼痛,活動受限等癥狀出現(xiàn)的主要原因。同時miR-146a被證明能有效抑制體內(nèi)炎癥反應(yīng)。本實驗是通過將miR-146a基因轉(zhuǎn)染至BMSCs中得到穩(wěn)定表達(dá)的重組干細(xì)胞,實現(xiàn)miR-146a在BMSCs中穩(wěn)定表達(dá)的可調(diào)控性,為下一步研究miR-146a基因修飾BMSCs在治療椎間盤突出癥導(dǎo)致的腰背部疼痛奠定實驗基礎(chǔ)。方法:通過全骨髓貼壁篩選法提取、分離SD大鼠BMSCs,并取第三代BMSCs通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測BMSCs表面抗原CD90、CD106、CD45來鑒定BMSCs。取第三代BMSCs轉(zhuǎn)染攜帶miR-146a基因的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染后觀察EGFP表達(dá)情況及感染率,應(yīng)用qRT-PCR、Western Blot技術(shù)分別檢測miR-146a基因及其靶蛋白IRAK-1、TRAF6表達(dá)情況。結(jié)果:經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)鑒定第三代BMSCs中表達(dá)CD90、CD106不表達(dá)CD45。攜帶miR-146a基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCs的最佳MOI值為50,轉(zhuǎn)染率可達(dá)80%;EGFP熒光表達(dá)48h后開始逐漸增強(qiáng);qRT-PC... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠BMSCs的體外培養(yǎng)（×100）

第三代大鼠BMSCs（×100）

MOI=50 時重組慢病毒轉(zhuǎn)染 BMSCsA 后 A：24h（×100）B：48（×100）C：96h（×100）Fig 4 When MOI=50, recombinant lentivirus was transfected into BMSCsA：after 24h (×100) B: after 48h (×100) C: after 96h (×100)C: 96h (x 100)


本文編號：2964161