發(fā)布時間：2021-01-08 07:08

　　目的:椎間盤突出后繼發(fā)的人體自身免疫反應和炎性刺激被認為是腰椎間盤突出癥患者腰背部及下肢疼痛,活動受限等癥狀出現(xiàn)的主要原因。同時miR-146a被證明能有效抑制體內炎癥反應。本實驗是通過將miR-146a基因轉染至BMSCs中得到穩(wěn)定表達的重組干細胞,實現(xiàn)miR-146a在BMSCs中穩(wěn)定表達的可調控性,為下一步研究miR-146a基因修飾BMSCs在治療椎間盤突出癥導致的腰背部疼痛奠定實驗基礎。方法:通過全骨髓貼壁篩選法提取、分離SD大鼠BMSCs,并取第三代BMSCs通過流式細胞技術檢測BMSCs表面抗原CD90、CD106、CD45來鑒定BMSCs。取第三代BMSCs轉染攜帶miR-146a基因的慢病毒載體,轉染后觀察EGFP表達情況及感染率,應用qRT-PCR、Western Blot技術分別檢測miR-146a基因及其靶蛋白IRAK-1、TRAF6表達情況。結果:經流式細胞技術鑒定第三代BMSCs中表達CD90、CD106不表達CD45。攜帶miR-146a基因的慢病毒載體轉染BMSCs的最佳MOI值為50,轉染率可達80%;EGFP熒光表達48h后開始逐漸增強;qRT-PC... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠BMSCs的體外培養(yǎng)（×100）

第三代大鼠BMSCs（×100）

MOI=50 時重組慢病毒轉染 BMSCsA 后 A：24h（×100）B：48（×100）C：96h（×100）Fig 4 When MOI=50, recombinant lentivirus was transfected into BMSCsA：after 24h (×100) B: after 48h (×100) C: after 96h (×100)C: 96h (x 100)


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