目的探討突變型HIF-1α（hypoxia-inducible factor-1α,低氧誘導因子-1α）修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）來源的外泌體（BMSC-Exo）對關(guān)節(jié)軟骨的保護作用及聯(lián)合小牛真皮來源軟骨再生支架治療家兔早期軟骨部分缺損。方法體外實驗:BMSC以及軟骨細胞的培養(yǎng);突變型HIF1-α修飾BMSC分泌的外泌體（BMSC-Exomu）及正常BMSC分泌的外泌體（BMSC-Exonor）用超高速離心法提取;Western blot（免疫蛋白印跡技術(shù)）檢測BMSC-Exo的表面蛋白標記物;炎癥介質(zhì)TNF-α誘導軟骨細胞凋亡,給予BMSC-Exomu和BMSC-Exonor,阿利辛藍染色察看軟骨基質(zhì)的分泌情況;MTT實驗檢測軟骨細胞活性情況;JC-1線粒體膜電位檢測軟骨細胞凋亡情況;Western blot分析MAPKs（絲裂原活化蛋白激酶）和AKT（蘇氨酸激酶）細胞信號通路在BMSC-Exos調(diào)節(jié)細胞凋亡過程中的作用。體內(nèi)實驗:12只新西蘭兔均行前交叉韌帶斷離術(shù)及部分軟骨層缺損術(shù),構(gòu)建軟骨部分缺損動物模型,將其分為四組,分別為單純?nèi)睋p組、支架植入治療組、支架+BMSC-E... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞培養(yǎng)及HIF1α基因轉(zhuǎn)染注：BMSC細胞培養(yǎng)（×100）（圖1.a）及兔軟骨細胞培養(yǎng)（×100）（圖1.b）；

容物為 BMSC-Exos。圖2：外泌體電鏡觀察及外泌體表面特異性蛋白分子標記物。注：掃描電鏡下觀察外泌體形態(tài)（圖2.a; scale bars=100nm）；BMSC-Exonor表面特異性蛋白分子標記物CD63，CD81（圖2.b）三、軟骨細胞攝取外泌體DAPI- 軟 骨 細 胞 共 培 養(yǎng) DIL-BMSC-Exo 的 熒 光 顯 微 鏡 觀 察 ， DIL 標 記BMSC-Exos（紅色）與DAPI標記軟骨細胞（藍色）共培養(yǎng)。起始共孵育時觀察，結(jié) 果一、細胞培養(yǎng)

s-Exos（×400）注：孵育起始熒光顯微鏡下觀察（圖 3.a）；孵育 3 小時后熒光顯微鏡下觀察（圖3.b）；孵育 6 小時后熒光顯微鏡下觀察（圖 3.c）四、細胞存活實驗（一）阿利新藍染色實驗正常軟骨細胞組，軟骨細胞數(shù)量最少，軟骨細胞分泌的軟骨糖胺多糖（GAG）最少；BMSC-Exonor處理組有少量新生軟骨細胞，分泌少量軟骨糖胺多糖；BMSC-Exomu處理組軟骨細胞數(shù)量最多，軟骨細胞分泌的軟骨糖胺多糖最多。（二）MTT實驗48h中各組細胞的吸光度值，與正常細胞組相對照，TNF-α組吸光度值呈下降趨勢，顯著低于對照組（P=0.001）；BMSC-EXonor組吸光度值上升趨勢，略高于對照組（P=0.008）、BMSC-Exomu組吸光度值上升趨勢，明顯高于對照組（P=0.001）。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2938698