突變型低氧誘導(dǎo)因子-1α修飾BMSC來源的外泌體對(duì)炎性因子誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及聯(lián)合再生支架治療家兔早期軟骨缺損的
發(fā)布時(shí)間：2020-12-26 00:44
目的探討突變型HIF-1α（hypoxia-inducible factor-1α,低氧誘導(dǎo)因子-1α）修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）來源的外泌體（BMSC-Exo）對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用及聯(lián)合小牛真皮來源軟骨再生支架治療家兔早期軟骨部分缺損。方法體外實(shí)驗(yàn):BMSC以及軟骨細(xì)胞的培養(yǎng);突變型HIF1-α修飾BMSC分泌的外泌體（BMSC-Exomu）及正常BMSC分泌的外泌體（BMSC-Exonor）用超高速離心法提取;Western blot（免疫蛋白印跡技術(shù)）檢測(cè)BMSC-Exo的表面蛋白標(biāo)記物;炎癥介質(zhì)TNF-α誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡,給予BMSC-Exomu和BMSC-Exonor,阿利辛藍(lán)染色察看軟骨基質(zhì)的分泌情況;MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)軟骨細(xì)胞活性情況;JC-1線粒體膜電位檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡情況;Western blot分析MAPKs（絲裂原活化蛋白激酶）和AKT（蘇氨酸激酶）細(xì)胞信號(hào)通路在BMSC-Exos調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡過程中的作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):12只新西蘭兔均行前交叉韌帶斷離術(shù)及部分軟骨層缺損術(shù),構(gòu)建軟骨部分缺損動(dòng)物模型,將其分為四組,分別為單純?nèi)睋p組、支架植入治療組、支架+BMSC-E...
【文章來源】：錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：45 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
細(xì)胞培養(yǎng)及HIF1α基因轉(zhuǎn)染注：BMSC細(xì)胞培養(yǎng)（×100）（圖1.a）及兔軟骨細(xì)胞培養(yǎng)（×100）（圖1.b）；
容物為 BMSC-Exos。圖2：外泌體電鏡觀察及外泌體表面特異性蛋白分子標(biāo)記物。注：掃描電鏡下觀察外泌體形態(tài)（圖2.a; scale bars=100nm）；BMSC-Exonor表面特異性蛋白分子標(biāo)記物CD63，CD81（圖2.b）三、軟骨細(xì)胞攝取外泌體DAPI- 軟 骨 細(xì) 胞 共 培 養(yǎng) DIL-BMSC-Exo 的 熒 光 顯 微 鏡 觀 察 ， DIL 標(biāo) 記BMSC-Exos（紅色）與DAPI標(biāo)記軟骨細(xì)胞（藍(lán)色）共培養(yǎng)。起始共孵育時(shí)觀察，結(jié) 果一、細(xì)胞培養(yǎng)
s-Exos（×400）注：孵育起始熒光顯微鏡下觀察（圖 3.a）；孵育 3 小時(shí)后熒光顯微鏡下觀察（圖3.b）；孵育 6 小時(shí)后熒光顯微鏡下觀察（圖 3.c）四、細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)（一）阿利新藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)正常軟骨細(xì)胞組，軟骨細(xì)胞數(shù)量最少，軟骨細(xì)胞分泌的軟骨糖胺多糖（GAG）最少；BMSC-Exonor處理組有少量新生軟骨細(xì)胞，分泌少量軟骨糖胺多糖；BMSC-Exomu處理組軟骨細(xì)胞數(shù)量最多，軟骨細(xì)胞分泌的軟骨糖胺多糖最多。（二）MTT實(shí)驗(yàn)48h中各組細(xì)胞的吸光度值，與正常細(xì)胞組相對(duì)照，TNF-α組吸光度值呈下降趨勢(shì)，顯著低于對(duì)照組（P=0.001）；BMSC-EXonor組吸光度值上升趨勢(shì)，略高于對(duì)照組（P=0.008）、BMSC-Exomu組吸光度值上升趨勢(shì)，明顯高于對(duì)照組（P=0.001）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]模擬微重力動(dòng)態(tài)培養(yǎng)構(gòu)建組織工程化軟骨修復(fù)豬關(guān)節(jié)軟骨缺損研究[J]. 林威,陳潔琳,劉威,楊坤,王大明,段莉,朱偉民,王大平. 中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志. 2016(05)
[2]外泌體的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 李曉,劉玲英,柴家科. 解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2015(10)
[3]脫細(xì)胞真皮基質(zhì)制備及其生物相容性研究[J]. 綦惠,杰永生,陳磊,江建,高新生,孫磊. 中國修復(fù)重建外科雜志. 2014(06)
[4]應(yīng)用小牛皮制備軟骨修復(fù)載體的脫毛-脫細(xì)胞-結(jié)構(gòu)改建工藝探討[J]. 綦惠,孫磊,陳磊,江建,杰永生,高新生. 中國矯形外科雜志. 2014(02)
本文編號(hào)：2938698
【文章來源】：錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：45 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
細(xì)胞培養(yǎng)及HIF1α基因轉(zhuǎn)染注：BMSC細(xì)胞培養(yǎng)（×100）（圖1.a）及兔軟骨細(xì)胞培養(yǎng)（×100）（圖1.b）；
容物為 BMSC-Exos。圖2：外泌體電鏡觀察及外泌體表面特異性蛋白分子標(biāo)記物。注：掃描電鏡下觀察外泌體形態(tài)（圖2.a; scale bars=100nm）；BMSC-Exonor表面特異性蛋白分子標(biāo)記物CD63，CD81（圖2.b）三、軟骨細(xì)胞攝取外泌體DAPI- 軟 骨 細(xì) 胞 共 培 養(yǎng) DIL-BMSC-Exo 的 熒 光 顯 微 鏡 觀 察 ， DIL 標(biāo) 記BMSC-Exos（紅色）與DAPI標(biāo)記軟骨細(xì)胞（藍(lán)色）共培養(yǎng)。起始共孵育時(shí)觀察，結(jié) 果一、細(xì)胞培養(yǎng)
s-Exos（×400）注：孵育起始熒光顯微鏡下觀察（圖 3.a）；孵育 3 小時(shí)后熒光顯微鏡下觀察（圖3.b）；孵育 6 小時(shí)后熒光顯微鏡下觀察（圖 3.c）四、細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)（一）阿利新藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)正常軟骨細(xì)胞組，軟骨細(xì)胞數(shù)量最少，軟骨細(xì)胞分泌的軟骨糖胺多糖（GAG）最少；BMSC-Exonor處理組有少量新生軟骨細(xì)胞，分泌少量軟骨糖胺多糖；BMSC-Exomu處理組軟骨細(xì)胞數(shù)量最多，軟骨細(xì)胞分泌的軟骨糖胺多糖最多。（二）MTT實(shí)驗(yàn)48h中各組細(xì)胞的吸光度值，與正常細(xì)胞組相對(duì)照，TNF-α組吸光度值呈下降趨勢(shì)，顯著低于對(duì)照組（P=0.001）；BMSC-EXonor組吸光度值上升趨勢(shì)，略高于對(duì)照組（P=0.008）、BMSC-Exomu組吸光度值上升趨勢(shì)，明顯高于對(duì)照組（P=0.001）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]模擬微重力動(dòng)態(tài)培養(yǎng)構(gòu)建組織工程化軟骨修復(fù)豬關(guān)節(jié)軟骨缺損研究[J]. 林威,陳潔琳,劉威,楊坤,王大明,段莉,朱偉民,王大平. 中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志. 2016(05)
[2]外泌體的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 李曉,劉玲英,柴家科. 解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2015(10)
[3]脫細(xì)胞真皮基質(zhì)制備及其生物相容性研究[J]. 綦惠,杰永生,陳磊,江建,高新生,孫磊. 中國修復(fù)重建外科雜志. 2014(06)
[4]應(yīng)用小牛皮制備軟骨修復(fù)載體的脫毛-脫細(xì)胞-結(jié)構(gòu)改建工藝探討[J]. 綦惠,孫磊,陳磊,江建,杰永生,高新生. 中國矯形外科雜志. 2014(02)
本文編號(hào)：2938698
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