目的:羽扇豆醇,五環(huán)三萜類化合物,來源于羽扇豆屬類植物,實驗研究表明,它具有廣泛的藥用價值,有很強(qiáng)的抗氧化、保肝、抗突變、抗炎、抗風(fēng)濕、抗腫瘤作用。近年來糖尿病發(fā)病率逐年升高,并成為影響中老年健康的主要原因之一。糖尿病發(fā)病率的逐年升高,隨之伴隨的慢性并發(fā)癥成為困擾人類健康的重要原因比如:慢性血管損傷、高脂血癥、肢體壞疽等。高糖環(huán)境下引起的氧化應(yīng)激已被發(fā)現(xiàn),氧化應(yīng)激對身體各個器官及組織均有明顯的損傷作用。研究已經(jīng)表明:氧化應(yīng)激引起的損傷是椎間盤退變的原因之一。本課題研究目的為:在高糖環(huán)境下,羽扇豆醇通過抗氧化應(yīng)激作用抑制兔髓核細(xì)胞的凋亡。方法:本課題分為四組:對照組、高糖組、羽扇豆醇組、高糖+羽扇豆醇組;首先從兔椎間盤中分離提取髓核細(xì)胞,并進(jìn)行培養(yǎng),選用第三代髓核細(xì)胞進(jìn)行實驗。將30-70ug/ml濃度范圍的羽扇豆醇培養(yǎng)基按照相同濃度梯度分為5組,對羽扇豆醇的最適濃度進(jìn)行篩選,進(jìn)而通過多功能孔板測讀儀分別進(jìn)行各組細(xì)胞內(nèi)總ROS檢測,流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率,熒光定量PCR檢測Bcl-2、Bax、細(xì)胞色素C、Caspase 9/3基因表達(dá),最后進(jìn)行蛋白印跡分析Bcl-2、Bax、細(xì)胞色... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同培養(yǎng)時間的原代髓核細(xì)胞注：a.原代髓核細(xì)胞接種后細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中呈圓形；b.原代細(xì)胞培養(yǎng)5d可見髓核細(xì)胞成簇生長；c.原代細(xì)胞培養(yǎng)2w后細(xì)胞可見小片狀連接；d.髓核細(xì)胞培養(yǎng)第21后融合達(dá)到90%左右

圖 2 髓核細(xì)胞鑒定結(jié)果：a. 甲苯胺藍(lán)染色：NP 細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色強(qiáng)陽性（200×）；b. 蘇木精伊紅染色：NP 細(xì)呈梭形、多角形，胞核呈圓形或橢圓形（200×）；c. 免疫組化染色：在 II 型膠原染色胞棕黃色（400×）；d. 免疫熒光染色：胞漿呈綠色熒光，與細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光（200×）。2.3.羽扇豆醇濃度篩選不同濃度的羽扇豆醇培養(yǎng)液（30–70μg/ml）培養(yǎng)髓核細(xì)胞 24 小時，應(yīng)用 cck-8檢測細(xì)胞的生長和增殖情況（圖 3），羽扇豆醇濃度為 60μg/mL 時，對細(xì)胞的性最小，所以我們選用該濃度的羽扇豆醇為我們的實驗濃度。表 1 各組細(xì)胞增殖活性（%）對照組 30ug/ml 40ug/ml 50ug/ml 60ug/ml 70ug/ml106.89 124.25 133.30 117.37 110.13 87.6997.39 120.3 121.72 99.01 104.26 70.6192.75 120.95 109.47 102.85 81.38 63.4093.80 107.03 96.17 110.63 96.02 68.85111.81 130.90 128 116.63 119.09 69.90

（圖 3）增殖活性檢測結(jié)果 Kit 檢測結(jié)果顯示：與對照組比較，羽扇豆醇組細(xì)胞增殖活性糖組細(xì)胞增殖活性明顯受抑制(P <0.01)；高糖+羽扇豆醇組細(xì)于高糖組 (P <0.05)，但其增殖活性仍低于對照組及羽扇豆醇的統(tǒng)計學(xué)意義（見圖 4）。表 2 各組髓核細(xì)胞增殖活性檢查：吸光光度值（OD 值）對照組 高糖組 羽扇豆醇組 高糖+羽扇2.1210 1.7760 2.0023 1.9022.2460 1.7671 2.1240 1.8092.5730 1.5678 2.4721 2.0012.2340 1.5678 2.4710 1.8832.5620 1.2351 2.3728 1.954


本文編號：2932322