研究背景與目的:自體脂肪移植是整形外科中最重要的修復(fù)重建技術(shù)手段之一,廣泛應(yīng)用于各種先天疾病及后天創(chuàng)傷所致的顏面畸形、乳腺癌術(shù)后的乳房重建和隆乳、以及年輕化手術(shù)等。然而其術(shù)后的移植物再吸收以及脂肪體積存留的不可預(yù)知性一直是阻止此項技術(shù)發(fā)展的瓶頸。移植組織存活的機制研究表明,早期血運的建立對脂肪顆粒的成活起到關(guān)鍵的作用。近十年興起的干細胞技術(shù)為此提供了新思路,并已有外科醫(yī)生應(yīng)用富含干細胞的基質(zhì)血管成分（stromal vascular fraction,SVF）進行臨床實踐,取得了良好的效果,但是背后機制不明確,干細胞在此過程中起到何種作用也未知。外泌體（exosomes）是近年干細胞研究的新熱點,它是一種細胞分泌的納米級別的生物囊泡,充當(dāng)了細胞間“通訊”載體的功能。既往研究結(jié)果顯示,外泌體參與機體多種病理生理過程,并且在組織器官損傷的修復(fù)以及促進血管生成方面都有效果。是干細胞強大旁分泌功能的承擔(dān)者之一。因此,本課題旨在研究干細胞外泌體是否可以通過刺激移植物的血管生成促進游離移植脂肪組織存活,為臨床提高自體脂肪填充手術(shù)的成功率提供一個新思路。方法:1.外泌體的純化及鑒定。（1）培養(yǎng)人原代... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２?ｈＡＤＳＣｓ具有向成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞多項分化的潛能（標(biāo)尺：５〇ｕｍ）??

一周后細胞質(zhì)中出現(xiàn)小點狀物質(zhì)，隨著誘導(dǎo)時間延長，小點逐漸增大成為小泡，??此時脂滴形成。３周后，小泡間相互融合，細胞內(nèi)脂滴增大、增多。油紅０染色顯示??出特定的橙紅色（圖１－２Ｆ）。??３．成軟骨誘導(dǎo)及鑒定??Ｐ３代ｈＡＤＳＣｓ成軟骨誘導(dǎo)６周后，細胞球被福爾馬林固定，經(jīng)包埋、切片、脫蠟，??阿爾新藍染色后，光鏡下觀察可見切片細胞外基質(zhì)呈包膜樣排列，阿爾新藍色染色陽??性（圖?１－２Ｈ）。??圓??圖１－２?ｈＡＤＳＣｓ具有向成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞多項分化的潛能（標(biāo)尺：５〇ｕｍ）??三、ｈＡＤＳＣｓ表面標(biāo)志物分析??流式細胞術(shù)檢測Ｐ３代ｈＡＤＳＣｓ細胞表面特異性蛋白標(biāo)志物。間質(zhì)細胞表面標(biāo)志物??陽性：ＣＤ９０?（?＋?）、ＣＤ１０５?（?＋?）、ＣＤ７３?（＋）、ＣＤ１６６?（?＋?）、ＣＤ２９?（?＋?）；無造血系??細胞標(biāo)志物表達：ＣＤ３４?（＿）、ＣＤ４５?（－），無巨噬細胞標(biāo)記物表達：ＣＤ１４?（－），無??內(nèi)皮細胞標(biāo)記物表達：ＣＤ３１?（－），無ＨＬＡ－ＤＲ表達（圖１－３）。??２６??

?＾＇Ｔｔ０ｉａｆｉ?Ｖ?ＦｆＴＣ?－Ａ?ｆ?ｔＴ＊ｌ?－Ａ??圖１－４?５％低氧條件下不同時間點ｈＡＤＳＣｓ凋亡率??五、人脂肪間充質(zhì)干細胞來源外泌體ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ形態(tài)學(xué)檢測??１．?ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ電子顯微鏡下形態(tài)??透射電子顯微鏡觀察下，外泌體呈現(xiàn)中央凹陷的茶杯樣（ｃｕｐ－ｓｈａｐｅｄ）及球形小囊??泡狀兩種典型的形態(tài)，直徑在ｌＯＯｎｍ左右（圖１－５－１）。??ｒ?：?ｖ”，：，??泛Ｉ?．－戒：免?＇＜‘害＼??圖１－５－１透射電鏡下ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ形態(tài)（標(biāo)尺：２００ｎｍ）??２．?ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ的粒子直徑分布??外泌體重懸液稀釋到ｌｍｌ后，上ＮａｎｏＳｉｇｈｔ納米粒子追蹤儀檢測，可實施觀測到放??２８??


本文編號：2896026