背景:臨床研究發(fā)現(xiàn)丙泊酚可以緩解哮喘病人的急性發(fā)作。鑒于T輔助細(xì)胞2型(T cell type 2,Th2)過(guò)度分化和凋亡抵抗在哮喘病理機(jī)制中的作用,A型γ-氨基丁酸(type A γ-aminobutyric acid,GABAA)受體存在于外周免疫系統(tǒng)并且參與免疫抑制,以及T細(xì)胞上有GABAA受體亞基的表達(dá),課題組提出如下假設(shè):丙泊酚可以通過(guò)抑制Th2細(xì)胞分化減輕Th2型哮喘炎癥。其機(jī)制可能與促進(jìn)分化過(guò)程中的Th2細(xì)胞凋亡和/或抑制Th2細(xì)胞增殖有關(guān)。丙泊酚通過(guò)興奮GABAA受體實(shí)現(xiàn)上述抗炎作用。本課題目標(biāo)是為丙泊酚安全用于哮喘患者提供抗炎相關(guān)理論基礎(chǔ)。方法:本課題分為3個(gè)部分。第一部分是建立哮喘小鼠模型。第二部分是活體小鼠實(shí)驗(yàn),應(yīng)用第一步成功建立的雞卵清蛋白(OVA)致敏及滴鼻激發(fā)的哮喘模型。在每次OVA滴鼻激發(fā)哮喘發(fā)作之前分別使用三種藥物干預(yù):丙泊酚、GABAA受體激動(dòng)劑蠅蕈醇(muscimol)、阻斷劑印防己毒素(picrotoxin)預(yù)處理后加用丙泊酚。取材檢測(cè)肺組織病理大體炎性改變,包括肺組織蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-esosin staining,HE)評(píng)分和肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)。檢測(cè)Th2型炎癥特征性改變,包括肺泡灌洗液中特征性細(xì)胞因子白介素4(interleukin 4,IL-4)、肺組織磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及激活因子(phosphorylated signal transducer and activator 6,pSTAT6)的表達(dá)。第三部分為離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn),提取健康小鼠脾臟,磁珠分選獲得T細(xì)胞,并加入細(xì)胞因子刺激Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞方向分化。并分別使用以下藥物干預(yù):丙泊酚、蠅蕈醇、印防己毒素預(yù)處理后加用丙泊酚以及輔劑脂肪乳。5天分化過(guò)程完成后檢測(cè)Th2型細(xì)胞因子IL-5分泌水平、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖指標(biāo)。結(jié)果:在活體小鼠實(shí)驗(yàn)部分,丙泊酚和蠅蕈醇顯著地降低了肺組織炎癥病理學(xué)評(píng)分、肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞的數(shù)目,以及Th2型細(xì)胞因子IL-4分泌和pSTAT6的表達(dá)水平。印防己毒素預(yù)處理組上述指標(biāo)顯著高于丙泊酚組。在離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分,丙泊酚和蠅蕈醇顯著降低了 Th2型細(xì)胞因子IL-5的分泌,并引起Th2細(xì)胞凋亡比例顯著增加。而印防己毒素預(yù)處理組上述指標(biāo)高于丙泊酚處理組。上述藥物處理均未顯著降低細(xì)胞增殖指標(biāo)。其輔劑脂肪乳組未顯示出對(duì)于凋亡或者增殖的影響。結(jié)論:丙泊酚對(duì)于Th2型哮喘小鼠炎癥有抑制作用,其作用是通過(guò)興奮GABAA受體,促進(jìn)分化過(guò)程中的Th2細(xì)胞凋亡進(jìn)而實(shí)現(xiàn)抑制Th2細(xì)胞分化。
【學(xué)位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院?北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院?博士學(xué)位論文??鏡下觀察：肺組織切片ＨＥ染色可見支氣管及血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以嗜酸??性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，氣道上皮多處斷裂或脫落，亦可見黏液細(xì)胞，基底膜輕??度增厚且形態(tài)不規(guī)則，細(xì)支氣管平滑肌輕度肥大，支氣管管壁輕度增厚。杯狀細(xì)胞??增多，大量黏液分泌，肺組織內(nèi)可見大量的肥大細(xì)胞顆粒。??與空白組相比，哮喘組支氣管及血管周圍出現(xiàn)大量的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，胞核??多為兩葉（馬蹄形），胞漿ＨＥ染色多呈橘紅色。血管和支氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)??顯著增多，包括嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等。哮喘組小鼠滴鼻激發(fā)組炎??癥評(píng)分（４．５±０．４）顯著高于霧化激發(fā)組（３．８±０．３）。??空白組?霧傾：ｉ：ｋ??

／?Ｚ?／?ｃ／?＜／與空白組相比，兩組哮喘組（霧化吸入組總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)目均顯著８．３＊１０５，?８．９＊１０５±６．２＊１０４，?１．０１＊１０６土７．９＊１組（分別為?６．０＊１０５±８＊１０４，２．５＊１０４±０．２＊１２．肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)（Ｔｏｔａｌ），肺泡灌洗泡灌洗液中淋巴細(xì)胞總數(shù)（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）。＜０．０５?（與空白組相比），�。迹埃埃�?（與霧化．肺泡灌洗液中ＩＬ－４的表達(dá)水平??與霧化吸入組（１０２±２２ｐｇ／ｍＬ）相比，滴平（３５８±６０ｐｇ／ｍＬ）顯著增高（見圖３）。??ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ??１５００００－??

與空白組相比，滴鼻激發(fā)組ＧＡＴＡ－３、ｐＳＴＡＴ６的表達(dá)均顯著増高（分別為０．９??±０．０５，?０．６２士０．２）?（，＜０．０５），而霧化激發(fā)組（０．６±０．０４，?０．２８土０．０６）顯著低于??滴鼻激發(fā)組（＃ｐ＜〇．〇５），與空白組差異無(wú)顯著性（見圖４）。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｇｒｏｕｐｌ?ＧｒｏｕｐＡ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｇｒｏｕｐ?Ｉ?Ｇｒｏｕｐ?Ａ??遍細(xì)?ｐ?誦?ｎｉｕ??Ａｃｔｉｎ??ＢＷＨｌ?Ａｃｔｍ??ＧＡＴＡ－３?ｐＳＴＡＴ６??１５１?０－８－ｊ?＊＃??Ｉ?ｉ．〇－?＊＃?｜?０６－?丁??ｉ?＾??＾?�。�?Ｈ?０－４－?＊??ｓ…麵?Ｓ?ｉ?ｉ?Ｈ邊??〇／?ｙ?ｙ?／?／?＾??圖４．肺組織中ＧＡＴＡ－３和磷酸化ＳＴＡＴ６的表達(dá)水平。（平均值士標(biāo)準(zhǔn)差，ｎ二１０）??＊戶＜０．０５?（與空白組相比），＃／？＜０．０５?（與霧化組相比）??四、實(shí)驗(yàn)討論??本部分結(jié)果通過(guò)比較滴鼻和霧化兩種方式，確定了滴鼻誘發(fā)相比霧化激發(fā)，能??夠誘發(fā)更加明顯的Ｔｈ２型哮喘炎癥。??滴鼻誘發(fā)哮喘需要考慮滴鼻溶液體積和ＯＶＡ藥物劑量，以確定能夠進(jìn)入呼吸??道并且有效誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)的變應(yīng)原劑量。有文獻(xiàn)比較了不同體積的ＯＶＡ溶液滴入??小鼠鼻孔后溶液在上下呼吸道的分布情況，結(jié)論為體積過(guò)�。ǎ担穑蹋⿻r(shí)藥物不能進(jìn)??入呼吸道，隨著體積增加，進(jìn)入呼吸道的藥物比例增大，大于５０ｐＬ時(shí)，該比例不??再增加。該文獻(xiàn)同時(shí)測(cè)定了麻醉狀態(tài)與清醒狀態(tài)下滴鼻進(jìn)入呼吸道藥物的比例，結(jié)??論為在麻醉狀態(tài)下
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李睿;劉恩梅;楊錫強(qiáng);王莉佳;;不同飼養(yǎng)環(huán)境、種屬、佐劑及激發(fā)方法對(duì)小鼠哮喘炎癥的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);2006年01期

2 楊偉敏;姜瑩;旺靜;丁雋;嚴(yán)國(guó)鋒;袁春萍;劉吉宏;陳學(xué)進(jìn);;四種麻醉藥物對(duì)小鼠自主意識(shí)恢復(fù)時(shí)間影響的觀察[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué);2009年02期

3 鄒毅;趙晶;邢麗嬌;辛鑫;龐寶森;黃克武;黃宇光;;異丙酚對(duì)哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥的調(diào)節(jié)作用[J];中華麻醉學(xué)雜志;2013年03期

本文編號(hào)：2867254