目的選用昆明小鼠制備皮膚深Ⅱ度燙傷模型。探討薰衣草油對深Ⅱ度燙傷皮膚的治療作用。檢測小鼠治療前后燙傷創(chuàng)面愈合和瘢痕形成情況,初步探討其作用機制。方法選取32只昆明小鼠,隨機分為四組,空白組6只、模型組6只、對照組10只,實驗組10只�？瞻捉M不進行模型建造,模型組、對照組、實驗組三組建立燙傷模型后分別外涂生理鹽水、多磺酸粘多糖乳膏和薰衣草油進行治療,兩次/日,療程28天�？瞻捉M、模型組、對照組和實驗組均使用腹腔注射10%水合氯醛(400mg/kg)對小鼠進行麻醉;麻醉后,8%硫化鈉溶液脫毛上背部的,面積為2cm X 4cm;于脫毛完畢恢復24h,將模型組、對照組、實驗組的小鼠脫毛區(qū)域局部外用70%乙醇進行消毒;將水浴箱加熱,待水溫升至95℃并設置恒溫,將小鼠脫毛區(qū)域置于恒溫箱蒸汽口上端10cm處,于10s后移開,燙傷面積約等于脫毛面積,均通過蒸汽燙傷法建立深Ⅱ度燙傷模型。予0.9%氯化鈉注射液2ml腹腔注射,以抗休克。成功建立模型后,對模型組、對照組和實驗組的小鼠分籠飼養(yǎng),并分別外涂生理鹽水、多磺酸粘多糖乳膏(喜療妥)和薰衣草油進行治療,兩次/日,療程28天。治療開始后,每日觀察以及文字記錄創(chuàng)面愈合和瘢痕形成情況,并拍照存檔。各組小鼠于第7天實施鼠尾取血,第28天實施眼球取血,將各組別血液離心后取出血清部分;第7天和第28天剪下各組別小鼠部分瘢痕組織,離心后取出上清液。將以上收集的標本分別裝入無菌離心管,標記后存入-80℃冰箱冷藏。待所有標本取齊后,從冰箱取出血清和組織上清液標本,于室溫(25℃)解凍,行ELISA檢測標本中TGF-β1、Ⅰ型前膠原、Ⅲ型前膠原、IL-10的含量變化。于治療第28天,剪下部分瘢痕組織并用10%中性甲醛固定后做好標記,制作病理切片,行脫水,HE染色。切片掃描。觀察創(chuàng)面及瘢痕形成情況的組織學形態(tài)改變,測量并記錄各組標本組織的表皮及瘢痕厚度。以400μm為單位,計算單位面積毛囊個數(shù),計數(shù)10個視野取平均值,評估毛囊生存情況。采用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0行數(shù)據(jù)分析,計算數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示,組間比較采用t檢驗和單因素方差分析。當方差齊性時,多組間均數(shù)比較采用方差分析LSD;當方差不齊時,采用KW。采用LSD方法對表皮厚度、瘢痕厚度兩指標進行組間比較分析;采用KW H檢驗對毛囊指標進行組間比較描述,指標描述采用M(P25-P75)描述。均以P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.建立深Ⅱ度燙傷模型1.1模型組、對照組、實驗組的小鼠均出現(xiàn)深Ⅱ度燙傷的皮膚創(chuàng)面體征及病理組織學表現(xiàn)。1.2空白組TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前膠原比值分別為64.3±9.25ng/ml、48.48±3.70ng/ml、1.35±0.04。2.各組別病程發(fā)展2.1模型組:創(chuàng)面肉眼觀察顏色紫紅,形狀不規(guī)則,觸之較硬且表面不平整。創(chuàng)面炎癥相對重,愈合慢。表皮、瘢痕及毛囊劇烈增生,表皮厚度為78.3±36.0μm、瘢痕厚度1129.2±495.1μm、單位面積內(nèi)毛囊數(shù)量3.5個。建立模型后第7天的TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前膠原比值分別為129.19±10.29ng/ml、58.54±4.17ng/ml、4.02±0.24;第28天分別為249.80±7.35ng/ml、67.25±2.83ng/ml、7.31±0.47,各標本值均隨著病程進展逐漸升高,且明顯高于正常(P0.05)。2.2對照組:創(chuàng)面肉眼觀察顏色粉紅,形狀較規(guī)則,觸之質(zhì)軟且表面較為平整。創(chuàng)面處炎癥相對輕微,愈合相對快,毛囊、表皮及瘢痕厚度增生較輕,表皮厚度為74.4±20.6μm、瘢痕厚度970.6±301.7μm、單位面積內(nèi)毛囊數(shù)量3個。建立模型后第7天TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前膠原比值分別為265.58±9.95ng/ml、73.64±8.10ng/ml、3.64±0.33;第28天分別為116.40±19.78ng/ml、59.70±3.59ng/ml、2.29±0.29,各標本值均在治療第7天顯著升高,于治療第28天大幅度下降,略高于正常(P0.05)。2.3實驗組:創(chuàng)面肉眼觀察呈鮮紅色,形狀較規(guī)則,觸之質(zhì)軟且表面平整。創(chuàng)面炎癥輕,愈合快;表皮、毛囊及瘢痕厚度增生相對弱(P0.05),表皮厚度為54.3±13.3μm、瘢痕厚度424.5±119.5μm、單位面積內(nèi)毛囊數(shù)量1個。建立模型后第7天的TGF-β1、IL-10、Ⅰ/Ⅲ型前膠原比值分別為303.57±8.03ng/ml、88.08±3.90ng/ml、3.20±0.27;第28天分別為69.45±11.31ng/ml、50.06±6.16ng/ml、1.79±0.51,各標本值均在治療第7天劇烈升高,于治療第28天基本降至正常(P0.05)。結(jié)論1.昆明小鼠可以制備皮膚深Ⅱ度燙傷模型,且能模擬人體皮膚燙傷在組織學及分子生物學上的特征性改變。2.燙傷小鼠體內(nèi)血清TGF-β1,IL-10,組織Ⅰ,Ⅲ型前膠原各指標表達與創(chuàng)面愈合呈正相關(guān)。薰衣草油通過改善機體血清TGF-β1,IL-10表達,調(diào)節(jié)組織內(nèi)Ⅰ/Ⅲ型前膠原的表達,顯著促進昆明小鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面愈合及抑制瘢痕形成。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R644
【部分圖文】：

圖 1 創(chuàng)面皮損形態(tài)學變化1：實驗組，2：對照組，3:模型組（a：治療后 3 天，b：治療后 7 天；c：治療后 28 天）組別組織病理學改變 結(jié)果見圖 2 和圖 3(HE 染色切片于 40X 鏡下白組：正常皮膚，表皮層薄，毛囊稀疏，真皮膠原稀疏。驗組：治療后的表皮輕度增生，真皮膠原纖維增生顯著弱于對不顯著，毛囊增生，但較模型組有顯著改善，上皮細胞分化相晰，炎癥細胞浸潤顯著輕于模型組，可見新生肉芽組織。照組：治療后的表皮及真皮層細胞出現(xiàn)較模型組輕的變性、壞模型組完整，真皮膠原纖維增生，瘢痕增生劇烈，毛囊增生，善，炎癥細胞浸潤較模型組輕，有少許分泌物。型組：建立模型后瘢痕增生劇烈的，表皮結(jié)構(gòu)不清晰，表皮與毛層受損，真皮處膠原纖維增生，膠原纖維化且大量成纖維細胞分布紊亂。表皮及真皮層大量細胞變性、壞死，炎癥細胞浸潤皮膚附屬結(jié)構(gòu)如毛囊結(jié)構(gòu)破損。

圖 3 各組別組織病理學改變（100X）（a：實驗組，b：對照組，c：模型組，d：空白組）LISA 檢測 TGF-β1、IL-10 、Ⅰ型前膠原/Ⅲ型前膠原比值的變化組別 TGF-β1 含量的變化 結(jié)果見表 1創(chuàng)面愈合整個過程中，各組別血清 TGF-β1 均處在動態(tài)變化中，空GF-β1 的均數(shù)為 64.3±9.25ng/ml(n=6)。療第 7 天，模型組血清 TGF-β1 的均數(shù)為 129.19±10.29ng/ml(n=6)，型組含量與空白組有明顯差異。治療前 7 天，模型組小鼠血清中 逐 漸 升 高 ； 治 療 第 7 天 ， 對 照 組 血 清 TGF-β1 的 均±9.95ng/ml(n=10)，P﹤0.05 表示對照組含量與模型組有明顯差異，血清 TGF-β1 含量；于治療第 7 天檢測實驗組血清 TGF-β1 的±8.03ng/ml(n=10)，P﹤0.05 表示實驗組含量與對照組有明顯差異，著提高血清 TGF-β1 含量。療第 28 天，實驗組血清 TGF-β1 的均數(shù)為 69.45±11.31ng/ml，基本平 ； 對 照 組 為 116.40±19.78ng/ml ， 稍 高 于 正 常 水 平 ； 模 型

度燙傷創(chuàng)面和瘢痕的他三組與實驗組組間比較，均有 P<0.05，表示有統(tǒng)計學意義。述結(jié)果比較顯示，在治療末期各組實驗動物的皮膚表皮厚度已意義的變化；從均數(shù)上看，使用薰衣草油的實驗組皮膚表皮厚。表 4 各組別表皮厚度變化情況（μm）別 n x sF 組 6 26.3±10.9#&※8.2 <組 6 78.3±36.0*※組 9 74.4±20.6*※組 10 54.3±13.3*#&0.05 與空白組比較 l，＃P﹤0.05 與模型組比較,&P﹤0.05 與對照0.05 與實驗組比較。（對照組制作病理切片時脫落一只）
【參考文獻】

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本文編號：2862166