【目的】證明過氧化物酶體增殖物激活受體PPARδ激動劑(GW0742)能夠促進人關節(jié)液來源的間充質(zhì)干細胞(human synovial fluid-derived mesenchymal stem cells,hSF-MSCs)成軟骨分化,并且能夠聯(lián)合hSF-MSCs更有效地抑制炎性環(huán)境中炎癥因子的表達�！痉椒ā坑�5ml注射器從膝骨關節(jié)炎患者患側(cè)關節(jié)腔內(nèi)抽取關節(jié)積液進行分離培養(yǎng),并進行鑒定。設置空白對照組、TGF-β1組、TGF-β1+GW0742組及GW0742組,采用Pellet法擬3D環(huán)境誘導hSF-MSCs成軟骨分化。通過比較各組細胞增殖速率、成軟骨分化相關標志物SOX9基因表達和蛋白合成量以及阿利新藍、甲苯胺藍染色等指標來評估GW0742對hSF-MSCs增殖及成軟骨分化能力的影響。另設置空白對照組、hSF-MSCs組、hSF-MSCs+GW0742組,通過比較第1、3天各組培養(yǎng)液中炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達來評估GW0742+hSF-MSCs組的抗炎效果�！窘Y(jié)果】通過直接貼壁法,成功從炎性關節(jié)液中分離培養(yǎng)hSF-MSCs,并鑒定屬于MSCs;就增殖能力而言,TGF-β1組、TGF-β1+GW0742組及GW0742組對hSF-MSCs無明顯影響;從PCR和Western Blot對SOX9檢測結(jié)果表明,GW0742組的hSF-MSCs成軟骨分化作用最為明顯;通過阿利新藍和甲苯胺藍染色結(jié)果可以觀察到,GW0742組能夠分泌較多的蛋白聚糖,且比TGF-β1+GW0742組染色更為致密;在抗炎效果方面,hSF-MSCs+GW0742組炎癥因子的含量明顯低于單純hSF-MSCs組�！窘Y(jié)論】PPARδ激動劑GW0742可能具備提升hSF-MSCs成軟骨分化的能力,并且聯(lián)合hSF-MSCs可能會增強在炎性環(huán)境中的抗炎效果。這為PPARδ激動劑聯(lián)合間充質(zhì)干細胞治療骨關節(jié)炎奠定了一定的理論基礎。
【學位單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R68
【部分圖文】：

結(jié) 果RESULTS1 細胞學觀察及鑒定1.1 hSF-MSCs 的細胞學觀察hSF-MSCs 接種 4h 后，可在顯微鏡下觀察到散在小圓點樣細胞貼壁，1d 后部分小圓點樣細胞變?yōu)殚L梭形細胞，其長軸徑較正常 MSCs 長，細胞透亮度難分辨細胞內(nèi)結(jié)構（如圖 1A、1B）。隨著細胞數(shù)量增加，細胞長軸徑逐漸，細胞透亮度逐漸升高，并且出現(xiàn)集簇放射狀單克隆細胞團落（如圖 1C）續(xù)傳代擴增培養(yǎng)后，第 3 代 hSF-MSCs 細胞形態(tài)以呈長梭形狀貼壁布滿整個（如圖 1D）。

圖 2 流式細胞技術檢測細胞表面抗原 CD105、CD73、CD29 呈陽性表達，CD45、CDHLA-DR 呈陰性表達3.1.3 成骨、成脂、成軟骨分化(1) 加入成骨誘導分化培養(yǎng)基后，細胞質(zhì)中逐漸出現(xiàn)高密度不透光物質(zhì)，隨著間加長，礦化物質(zhì)逐漸增多，且面積增大，約 21 天后行茜素紅染色，可細胞質(zhì)中有棕黃色或橙紅色物質(zhì)沉積，如圖 3A 所示。(2) 加入成脂誘導分化培養(yǎng)基后，細胞形態(tài)逐漸由長梭形變?yōu)闄E圓形，14 天后現(xiàn)細胞直徑縮小，形態(tài)逐漸變?yōu)閳A形或不規(guī)則形，排列較為雜亂，約 21行油紅 O 染色呈陽性，如圖 3B 所示。(3) 采用 Pellet 法加入成軟骨誘導分化培養(yǎng)基后，沉于離心管底部的細胞團斷回縮，逐漸形成球狀細胞團，換液時輕彈離心管底部可見細胞球能夠從部漂起并緩慢再次沉于底部。誘導后 14 天，換液時輕觸細胞球，可見細

26圖 3 hSF-MSCs 三系分化及其染色（A 為成骨分化茜素紅染色，B 為油紅 O 染色，C 為法成軟骨分化，D 為成軟骨分化軟骨球，E 為成軟骨分化 HE 染色，F(xiàn) 為成軟骨分化阿藍染色）3.1.4 hSF-MSCs 生長曲線繪制及增殖能力評估
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 閆繼紅;楊姝;孫海梅;曹丹丹;張秀英;季鳳清;郭多;吳波;孫婷怡;周德山;;共沉默miR-221-3p/222-3p表達抑制骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及促成軟骨分化[J];中國組織工程研究;2015年50期

2 魏于全;杭振鑣;;間葉源性軟骨肉瘤向纖維軟骨分化(附1例光鏡、組織化學及電鏡觀察)[J];華西醫(yī)訊;1989年02期

3 陳波;張壽;;誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨分化的影響因素研究進展[J];海南醫(yī)學;2013年10期

4 修忠標,林建華;骨髓間充質(zhì)干細胞軟骨分化生物學的影響因素[J];骨與關節(jié)損傷雜志;2004年08期

5 方楚玲;田京;;間充質(zhì)干細胞成軟骨分化相關研究進展[J];國際骨科學雜志;2014年01期

6 雍志軍;賈帥軍;韓林章;周翔;戶剛;郝賦;劉建;;富血小板纖維蛋白對兔骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨分化的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2014年08期

7 陳俠甫;金旭紅;黃鄧高;邢勢;王和杰;卓澤銘;車家駒;;低強度脈沖超聲對人臍帶干細胞體外增殖和成軟骨分化的影響[J];中國康復醫(yī)學雜志;2019年05期

8 黃弘軒;張姝江;白波;;調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨分化的研究進展[J];中華關節(jié)外科雜志(電子版);2017年06期

9 邱靜怡;萬凌云;趙志河;李娟;;內(nèi)外源性應力對間質(zhì)干細胞成軟骨分化的調(diào)控[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2016年04期

10 張宇坤;楊述華;孫立;楊操;田洪濤;徐亮;;生長分化生長因子-5在誘導小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞軟骨分化中的作用[J];中華創(chuàng)傷雜志;2006年12期

相關博士學位論文 前10條

1 蔣超;血清纖維黏連蛋白促晚期骨關節(jié)炎患者軟骨下松質(zhì)骨祖細胞軟骨分化[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

2 唐仲文;骨不連細胞體外培養(yǎng)及壓應力刺激對其成軟骨分化影響的研究[D];中南大學;2014年

3 王亮;人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨及成軟骨分化中長鏈非編碼RNA的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

4 劉姍姍;7，8-二羥基香豆素促進大鼠脂肪來源間充質(zhì)干細胞增殖及成軟骨分化的研究[D];吉林大學;2012年

5 曲峰;Wnt3a對骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨分化影響的研究[D];南開大學;2013年

6 白曉卉;ADAMTS-7和ADAMTS-12抑制軟骨分化的功能研究[D];山東大學;2009年

7 房維;軟骨調(diào)節(jié)素-1在顳下頜關節(jié)軟骨及軟骨分化中的表達[D];武漢大學;2010年

8 叢銳軍;滑膜間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨分化的條件及分子機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

9 王大偉;1、GEP蛋白在骨骼肌分化過程中的功能研究 2、ADAMTS-12抑制軟骨分化的功能研究[D];山東大學;2009年

10 虞冀哲;極低頻電磁場促進骨髓間充質(zhì)干細胞定向分化的實驗研究[D];華中科技大學;2013年

相關碩士學位論文 前10條

1 魏媛媛;KDM6A對牙周膜干細胞成軟骨分化中MiR-204和MiR-211表達的影響及意義[D];天津醫(yī)科大學;2018年

2 常崇斐;PPARδ激動劑對人關節(jié)液來源的間充質(zhì)干細胞成軟骨分化及抗炎效果的影響[D];廣州醫(yī)科大學;2018年

3 吳玉喜;共培養(yǎng)誘導間充質(zhì)干細胞成軟骨分化以及培養(yǎng)方式對軟骨細胞表型的影響[D];華東理工大學;2018年

4 馮江峰;Kartogenin通過調(diào)節(jié)SOX9促進小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成軟骨分化的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學;2018年

5 王志寬;兔骨髓間充質(zhì)干細胞與Buffy coat體外軟骨分化的比較分析[D];延邊大學;2017年

6 楊以萌;發(fā)散式?jīng)_擊波對骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)成軟骨分化影響[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2017年

7 楊丹聃;無血清條件培養(yǎng)基法誘導人胚胎干細胞成軟骨分化的研究[D];吉林大學;2015年

8 黃朋;兔脂肪干細胞的分離培養(yǎng)鑒定及成軟骨分化的實驗研究[D];華中科技大學;2012年

9 甘鳳英;生長因子聯(lián)合誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨分化的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2006年

10 宣濤;骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及組合生長因子對其成軟骨分化的一般研究[D];安徽醫(yī)科大學;2009年

本文編號：2858641