急性肝損傷作為臨床常見問題之一,受到了廣大醫(yī)學工作者的長期關(guān)注。其基本病理過程為肝細胞的大量損傷和肝功能的下降。急性肝功能損傷過程如果不加以控制,則有可能導致會導致肝損傷的進一步加重,致使損傷的遷延不愈,形成慢性肝損傷乃肝硬化;更有甚者,短期內(nèi)肝臟損傷程度大大超過肝臟代償能力,導致暴發(fā)性肝衰竭的發(fā)生,嚴重危害患者生命健康。急性肝損傷的發(fā)病機制現(xiàn)階段尚未完全闡明,但巨噬細胞作為機體免疫系統(tǒng)的重要組分參與了整個損傷的過程,并在不同階段發(fā)揮出截然不同的生物學作用。Kv1.3是電壓門控的鉀離子通道,已有多項研究證明其在免疫調(diào)節(jié)中的重要作用。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn),巨噬細胞膜上也分布著大量的Kv1.3離子通道。阻斷Kv1.3和/或影響其表達勢必會對巨噬細胞功能產(chǎn)生影響其中就包括巨噬細胞本身的遷移能力。因此,本研究的主要科學假說為—Kv1.3通過抑制巨噬細胞遷移能力阻礙巨噬細胞招募,進而減輕急性肝損傷。為了驗證科學假說及進一步探究其可能機制,我們設(shè)計了以下實驗:1.建立LPS/D-GaIN聯(lián)合誘導急性肝損傷模型,同時給予MgTX干預觀察其損傷變化LPS的D-GaIN聯(lián)合誘導的急性肝損傷模型建立成功,模型組肝臟病理學、血清學指標均較對照組上升,差異具有統(tǒng)計學意義。同時使用了Kv1.3特異性阻滯劑后,肝損傷指標減輕。單獨運用Kv1.3阻滯劑對小鼠本身未產(chǎn)生不良影響。2.檢測急性肝損傷過程中巨噬細胞招募情況針對小鼠腹腔巨噬細胞的涂片和對肝臟的CD68免疫組化染色,結(jié)果發(fā)現(xiàn)L/D組小鼠,腹腔巨噬細胞大量滲出。同時,肝內(nèi)巨噬細胞比例增高。提示大量單核細胞來源的巨噬細胞被招募至肝臟。而MgTX處理后,腹腔巨噬細胞滲出減少,招募至肝臟的炎性巨噬細胞相對應減少。3.體外探究MgTX對巨噬細胞遷移能力的影響當使用MgTX 10nM處理后,無論是劃痕實驗還是Transwell實驗都提示Raw264.7細胞的遷移能力受到了抑制,差異具有統(tǒng)計學意義。4.體外探究MgTX對Kv1.3表達水平的影響采用MgTX 10nM處理后,Raw264.7細胞的Kv1.3蛋白水平和mRNA水平均未發(fā)生明顯變化,免疫熒光結(jié)果同樣證實了上述結(jié)果。提示MgTX對于Kv1.3的影響并非通過影響其表達水平來實現(xiàn)。5.通過沉默或過表達Kv1.3輔證其生物學功能為了證實Kv1.3對巨噬細胞遷移功能的影響,我們沉默和過表達了Kv1.3蛋白。結(jié)果顯示沉默Kv1.3后,巨噬細胞遷移能力明顯下降。過表達Kv1.3后,巨噬細胞遷移能力增加。通過我們的實驗得出:Mtgx可以抑制巨噬細胞遷移能力,減少其在炎癥初期的招募減輕肝臟損傷。巨噬細胞的遷移能力可以被Kv1.3表達變化所調(diào)控。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R614
【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
第一部分 阻斷Kv1.3 減輕急性肝損傷的機制研究前言
    1.前言
    2 材料和方法
    3 結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻
第二部分 異丙酚對巨噬細胞遷移能力的影響前言
    前言
    2 材料和方法
    3 結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻
附錄
致謝
綜述 麻醉藥物與機體抗炎免疫
    參考文獻

【參考文獻】

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本文編號：2845753