研究背景和目的隨著高血壓、糖尿病、腫瘤等疾病發(fā)病率的增加,以及各類外傷和自然災(zāi)害頻繁發(fā)生,臨床上經(jīng)常遇到各種類型的難愈創(chuàng)面或者大面積組織缺損。覆蓋及修復(fù)受損組織是整形科修復(fù)重建領(lǐng)域常見病種之一。而皮瓣則是修復(fù)重建領(lǐng)域最常用到的修復(fù)手段之一,尤其以技術(shù)要求簡單的隨意皮瓣最為常用,而皮瓣的壞死是困擾整形外科醫(yī)生的難題。雖然有各種預(yù)防和治療皮瓣壞死的治療手段,例如抗血管痙攣藥物、局部物理治療及高壓氧治療等,仍無法完全避免皮瓣壞死的發(fā)生及發(fā)展。再生醫(yī)學(xué)技術(shù)的研究成果,為組織或器官的損傷或缺損修復(fù)重建研究提供了嶄新的治療方法和可能性,逐漸成為現(xiàn)在最前沿和最具潛力的生理性修復(fù)技術(shù)之一。間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞。其具有取材容易、具有多向分化能力、且其免疫原性低、存儲量大等特點(diǎn),間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸成為目前再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和組織工程化研究領(lǐng)域中最理想的種子細(xì)胞之一。Zuk等從抽脂術(shù)后廢棄的脂肪組織中分離得到一類與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性十分相似的干細(xì)胞,隨后這一類細(xì)胞被命名為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCsAdipose-derived stem cells)。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似,ADSCs 同樣具有多向分化潛能,在不同條件培養(yǎng)基的誘導(dǎo)下,ADSCs可以分化為多種成體細(xì)胞,如脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等。因?yàn)橹緛碓吹拈g充質(zhì)干細(xì)胞具有含量多,分離相對容易,能夠避免倫理學(xué)問題等眾多優(yōu)點(diǎn),逐漸成為相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜覍W(xué)者研究的重點(diǎn)。但是由于ADSCS的獲取需要經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng),對于臨床應(yīng)用來說周期相對較長。隨后人們發(fā)現(xiàn)富含ASCs的血管基質(zhì)片段(stromal vascular fraction,SVF)細(xì)胞,但是SVF細(xì)胞群獲取中經(jīng)歷了加入膠原酶消化這一必不可少的操作。SVF細(xì)胞的分離需要用膠原酶消化30分鐘至1小時,這將導(dǎo)致外源性物質(zhì)在制備過程中可能發(fā)生的外源性污染;而且異種蛋白帶來的生物污染也是不容忽視的。另外,ASCs的貼壁培養(yǎng)和純化需要特定的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和操作人員豐富的操作經(jīng)驗(yàn),并且可能需要數(shù)天至數(shù)周,這將導(dǎo)致大多數(shù)缺血性疾病無法得到及時的治療。從而給臨床應(yīng)用帶來生物安全方面及時效性的困擾。所以造成了所有的研究大多數(shù)停留在實(shí)驗(yàn)室,而沒有辦法應(yīng)用到臨床治療中。本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)表在PRS上面的文章提出一種我們提出的脂肪組織提取物,我們將其命名為SVF-gel,這種脂肪組織提取物起到了明顯的濃縮脂肪干細(xì)胞的作用,其中含有脂肪干細(xì)胞的濃度達(dá)到了 10的五次方,能滿足細(xì)胞療法對細(xì)胞數(shù)量的滿足。而且相比較單純的SVF和ADSC來說,SVF-gel富含ECM,這種由ECM包裹細(xì)胞的組織結(jié)構(gòu)可能更利于脂肪干細(xì)胞能夠進(jìn)入體內(nèi)之后的存活過程。因?yàn)镋CM相當(dāng)于形成了一個細(xì)胞龕,我們推測這種細(xì)胞龕樣結(jié)構(gòu)可以保護(hù)細(xì)胞移植之后減少巨噬細(xì)胞對于細(xì)胞的吞噬作用,從而使得脂肪干細(xì)胞能夠存活在移植區(qū)域發(fā)揮更持久的細(xì)胞療法作用。方法與實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)共分為三組,處理因素分別為人SVF-gel,SVF細(xì)胞懸液,生理鹽水,(n= 10),在裸鼠背部皮瓣手術(shù)后即刻對皮瓣進(jìn)行注射,隨后的觀察壞死和血管形成情況。通過Masson三色染色和免疫熒光等方法檢測皮瓣的皮膚健康情況和新生血管。采用組織定量qRT-PCR進(jìn)行檢測促血管相關(guān)細(xì)胞因子VEGF和bFGF。最后,我們用免疫熒光追蹤移植到裸鼠的人體組織。與鹽水對照組(53.78%±0.1412)和 SVF 處理組(35.54%±0.0850,P = 0.039)相比,SVF-gel處理的皮瓣的壞死區(qū)最小(22.05%±0.0438)。SVF-gel移植物周圍形成許多功能性肌皮穿支。SVF-gel處理皮膚脂肪組織恢復(fù)最好(231.3±48.1 μm)(F= 10.83,p = 0.0102),而鹽水處理皮瓣遠(yuǎn)端出現(xiàn)纖維化。與生理鹽水處理的對照相比,經(jīng)SVF-gel處理的皮瓣也具有43%以上的CD31+毛細(xì)血管(p = 0.0152),VEGF和bFGF的血管生成細(xì)胞因子的基因表達(dá)增多(p值分別為0.0310和0.0303)。此外,我們發(fā)現(xiàn)hSVF-gel細(xì)胞(hGolgi +)能直接作為血管成分(α-平滑肌肌動蛋白,α-SMA+)參與到皮瓣血管新生過程中。結(jié)論脂肪組織來源干細(xì)胞基質(zhì)膠中的細(xì)胞成分可能通過與皮瓣新生血管的部分直接結(jié)合,改善皮瓣存活和促成更健康的皮瓣組織。使用SVF-gel選擇性脂肪移植表現(xiàn)出與干細(xì)胞療法相當(dāng)?shù)墓π?并且對于臨床應(yīng)用有巨大前景和價值。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R622
【部分圖文】：

圖１－１?ＳＶＦ?－?ｇｅｌ的標(biāo)準(zhǔn)制備流程。??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ?ｏｆ?ＳＶＦ?－?ｇｅｌ．??１．２．２?ＳＶＦ細(xì)胞的分離與計數(shù)??

圖２－１?ＡＳＣＳ從ＳＶＦ－ｇｅｌ中遷出??

茜素紅Ｓ?（成骨）和阿爾新藍(lán)（軟骨形成）分別染色。上述檢測結(jié)果如??下圖所示。從左至右為油紅〇染色的成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；茜素紅染色的成骨誘??導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；阿爾新藍(lán)染色的成軟骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。從圖２－３可知，ＳＶＦ?－?ｇｅｌ??中的ＡＳＣｓ增殖及成脂、成骨、成軟骨分化能力均正常，其具有多向分化能力。??ＭＨ??圖２－２?ＡＳＣｓ三系分化??Ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｉｎｃｕｂａｔｅｄ?ｉｎ?ａ?ｍｅｄｉｕｉｎ?ｋｎｏｗｎ?ｔｏ?ｉｎｄｕｃｅ?ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ，?ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ，?ａｎｄ?ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃ??ｌｉｎｅａｇｅｓ．?Ｃｅｌｌｓ?ｃｏｎｔａｉｎｅｄ?ｌｉｐｉｄ?ｄｒｏｐｌｅｔｓ，?ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ?ｍａｔｒｉｘ?ｍｉｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎ，?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ??ｃａｒｔｉｌａｇｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ，?ａｎｄ?ｗｅｒｅ?ｓｔａｉｎｅｄ?ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ?ｆｏｒ?Ｏｉｌ－Ｒｅｄ?０?（ａｄｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ），??Ａｌｉｚａｒｉｎ?Ｒｅｄ?Ｓ?（ｏｓｔｅｏｇｅｎｅｓｉｓ），?ａｎｄ?Ａｌｃｉａｎ?Ｂｌｕｅ?（ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓ），?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ?．??１１??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells[J];Chinese Medical Journal;2005年23期

本文編號：2844265