目的:本研究通過體外實驗,初步研究SYT-SSX1融合基因?qū)と饬?synovial sarcoma,SS)球體細(xì)胞(sphere)的影響,探討TGF-β1信號通路調(diào)控SYT-SSX1對滑膜肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的作用,為進(jìn)一步研究滑膜肉瘤腫瘤干細(xì)胞靶向治療提供一定理論基礎(chǔ)。方法:用SYT-SSX1融合基因慢病毒轉(zhuǎn)染滑膜肉瘤SW982細(xì)胞,構(gòu)建SYT-SSX1高表達(dá)細(xì)胞系,One step RT-PCR檢測SYT-SSX1 m RNA表達(dá)。無血清懸浮方法培養(yǎng)sphere。運用q RT-PCR、WesternBlot、流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后CSC標(biāo)記物m RNA及蛋白表達(dá),Transwell實驗檢測轉(zhuǎn)染前后球細(xì)胞的遷移能力。TGF-β1重組劑和抑制劑SB431542處理SYT-SSX1高表達(dá)和對照組sphere細(xì)胞。運用q RT-PCR、Western-Blot、流式細(xì)胞儀檢測各組CSC標(biāo)記物m RNA及蛋白表達(dá),運用正態(tài)性檢驗、t檢驗等進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:(1)通過無血清懸浮方法培養(yǎng)后,發(fā)現(xiàn)SYT-SSX1型高表達(dá)細(xì)胞比未處理組細(xì)胞成球數(shù)目多,體積大,成球率高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01,P0.001),表明SYT-SSX1融合基因能促進(jìn)滑膜肉瘤sphere的形成。q RT-PCR、Western-Blot和流式細(xì)胞儀結(jié)果表明:SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞干性比未處理組sphere細(xì)胞強,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。(2)重組劑TGF-β1處理SYT-SSX1sphere細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)隨著rh TGF-β1濃度升高,SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞數(shù)目逐漸增加,單個sphere細(xì)胞體積逐漸增大。當(dāng)rh TGF-β1濃度為10ng/ml,增加最明顯,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。q RT-PCR、Western-Blot和流式細(xì)胞儀結(jié)果表明:隨著rh TGF-β1濃度升高,SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞干性逐漸增強。當(dāng)rh TGF-β1濃度為10ng/ml,SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞干性達(dá)到最強,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01,P0.001)。(3)抑制劑SB431542處理SYT-SSX1 sphere細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)隨著SB431542濃度升高,SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞數(shù)目逐漸減少,單個sphere細(xì)胞體積逐漸變小。當(dāng)SB431542濃度為40 UM時,減少最明顯,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。q RT-PCR、WesternBlot和流式細(xì)胞儀結(jié)果表明:隨著SB431542濃度升高,SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞干性逐漸減弱。當(dāng)SB431542濃度為40 UM時,SYT-SSX1型高表達(dá)sphere細(xì)胞干性達(dá)到最弱,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01,P0.001)。結(jié)論:1.SYT-SSX1融合基因可能促進(jìn)滑膜肉瘤sphere細(xì)胞的增殖,并且可能增強滑膜肉瘤sphere細(xì)胞的干性。2.TGF-β1信號通路可能通過SYT-SSX1融合基因增強滑膜肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的干性特征。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R738
【部分圖文】：

TGF-β1 信號通路調(diào)控 SYT-SSX1 誘導(dǎo)滑膜肉瘤干性特征的初步研究結(jié) 果（Results） 成功構(gòu)建 SYT-SSX1 型融合基因高表達(dá) SS 細(xì)胞.1 SYT-SSX1 型融合基因慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞的形態(tài)特征SW982 細(xì)胞系（ATCC 庫）為 SYT-SSX 融合基因陰性滑膜肉瘤細(xì)胞，本采用慢病毒轉(zhuǎn)染方法成功構(gòu)建 SYT-SSX1 型融合基因高表達(dá)細(xì)胞， 48h 后染組，瘤細(xì)胞呈長梭形，成巢團(tuán)分布，較為稀疏；轉(zhuǎn)染組瘤細(xì)胞變?yōu)槎趟笮芜呅危?xì)胞核較大，胞質(zhì)透明，且細(xì)胞密度明顯比未轉(zhuǎn)染組大，表明 SYT-SS夠明顯促使瘤細(xì)胞生長，如圖 1。

2. SYT-SSX1 高表達(dá)細(xì)胞系。圖 A 為 SYT-SSX1 高表達(dá)細(xì)胞，圖 B 為 SYT-SSX1 高表達(dá)胞白光（×100），轉(zhuǎn)染效率約 93.86%（0.9386 ± 0.02），圖 C 為 SYT-SSX1 高表達(dá)細(xì)胞的One Step RT-PCR 產(chǎn)物電泳圖。PCR 產(chǎn)物為 118bp，SYT-SSX1 融合基因檢測為陽性。無血清培養(yǎng) SW982、SYT-SSX1 型 sphere 細(xì)胞比較 SYT-SSX1 融合基因?qū)と饬?sphere 細(xì)胞成球數(shù)目、體積、成球率的影響無血清懸浮培養(yǎng) SW982 與 SYT-SSX1 高表達(dá)細(xì)胞， 24 小時后，兩組細(xì)胞絕大多數(shù)呈單個懸浮生長，無明顯差異；48 小時后 SYT-SSX1 高表達(dá)細(xì)胞可見部分 sphere 形成，SW982 細(xì)胞僅見少量的 sphere 形成，單個球體細(xì)胞之間排列不緊密，形狀不規(guī)則，有一定的折光性；72 小時后，SYT-SSX1 高表達(dá)細(xì)胞可見大量 sphere 形成（圖 3B），單個球體細(xì)胞之間排列緊密，懸浮生長，球體為圓形或者橢圓形，SW982 細(xì)胞可見部分 sphere 形成（圖 3A）。成球培養(yǎng) 72 小時后，進(jìn)行成球數(shù)目、體積、成球率比較。實驗結(jié)果表明：（1成球數(shù)目：SYT-SSX1 型高表達(dá)細(xì)胞比 SW982 細(xì)胞成球數(shù)目多，SYT-SSX型高表達(dá)細(xì)胞成球數(shù)是 SW982 的 2.5 倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）（圖

TGF-β1 信號通路調(diào)控 SYT-SSX1 誘導(dǎo)滑膜肉瘤干性特征的初步研究異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）（圖 3D），（3）成球率：SYT-SSX1 型高表達(dá)細(xì)胞的成球率比 SW982 細(xì)胞高，SYT-SSX1 型細(xì)胞成球率是 SW982 的 3.6 倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）（圖 3E），如圖 3，表 1。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李正強;;滑膜肉瘤1例報告[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與健康研究電子雜志;2018年03期

2 孫麗琴;郭紅梅;張曉梅;;滑膜肉瘤患者一例截肢護(hù)理體會[J];中國藥物與臨床;2017年05期

3 趙松濤;羅鵬;吳準(zhǔn);邢金春;徐胤燁;;原發(fā)性腹膜后滑膜肉瘤1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志;2017年01期

4 查振雷;屈峰;鄭金榆;連惠波;甘衛(wèi)東;張古田;蘭厚金;郭宏騫;;原發(fā)性腹膜后滑膜肉瘤合并妊娠1例報告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];臨床泌尿外科雜志;2017年06期

5 儲真真;石可金;;滑膜肉瘤的病因和中醫(yī)防治方法[J];家庭中醫(yī)藥;2016年06期

6 儲真真;石可金;;滑膜肉瘤的中西醫(yī)認(rèn)識[J];家庭醫(yī)學(xué)(下半月);2016年06期

7 ;滑膜肉瘤及其他[J];科學(xué)養(yǎng)生;2016年07期

8 李曉霞;劉飛飛;張仁亞;;胃滑膜肉瘤[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2009年01期

9 王善琛;張陽英;廖穗祥;夏虹;;上頸椎滑膜肉瘤1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2008年11期

10 劉建永;姜鑫;;腋下多次復(fù)發(fā)的巨大滑膜肉瘤1例[J];實用骨科雜志;2008年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 孫燕;SYT-SSX對滑膜肉瘤的診斷和預(yù)后意義及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

2 蔡文娟;滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX及細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶通路調(diào)控細(xì)胞增殖的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉子涵;TGF-β1信號通路調(diào)控SYT-SSX1誘導(dǎo)滑膜肉瘤干性特征的初步研究[D];石河子大學(xué);2018年

2 牛朝榮;原發(fā)性滑膜肉瘤的臨床病理學(xué)特征及TLE1蛋白的表達(dá)意義[D];鄭州大學(xué);2018年

3 楊靜;滑膜肉瘤融合基因及組織發(fā)生研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

4 馮秋月;肺原發(fā)性滑膜肉瘤1例報告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[D];山東大學(xué);2007年

5 尹航;24例滑膜肉瘤的臨床分析[D];延邊大學(xué);2012年

6 楊翎;滑膜肉瘤的組織病理學(xué)，免疫組織化學(xué)及分子生物學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

7 蔡文娟;滑膜肉瘤融合基因分型及其與細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)性的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

8 晉薇;滑膜肉瘤相關(guān)生物標(biāo)志物的臨床病理研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

9 張順利;（一）—棉酚對滑膜肉瘤細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其機制的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

10 孫燕;滑膜肉瘤中細(xì)胞黏附分子和腫瘤侵襲相關(guān)蛋白酶的表達(dá)及其生物學(xué)意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

本文編號：2839962