背景和目的目前,肝切除術(shù)后肝功能不全(post-hepatectomy liver dysfunction,PLD)依然是影響患者圍手術(shù)期恢復及誘發(fā)術(shù)后肝功能衰竭(post-hepatectomy liver failure,PHFL)甚至死亡的主要原因,其病理生理機制仍未完全闡明。研究發(fā)現(xiàn)肝切除術(shù)后過度活躍的炎性反應(yīng)是誘發(fā)PLD甚至PHLF的重要因素。大量文獻表明過度的炎性反應(yīng)可抑制肝再生(liver regeneration)過程,適度的炎癥反應(yīng)可促進肝再生。巨噬細胞是機體固有免疫中重要組成部分,在協(xié)調(diào)炎癥發(fā)展過程發(fā)揮重要作用,可分兩種極化類型:經(jīng)典活化型(classically activated macrophages,CAMs)和選擇性活化型(alternatively activated macrophages,AAMs),即M1型和M2型。目前研究認為,M1型可以通過分泌多種促炎因子,促進炎癥的發(fā)生發(fā)展;M2型則可以通過分泌多種抗炎因子抑制炎癥反應(yīng)。鞘脂組學中鞘脂類物質(zhì)神經(jīng)酰胺(ceramide,CER)及其代謝產(chǎn)物與細胞增殖、凋亡及炎癥反應(yīng)關(guān)系密切密切。本課題將圍繞巨噬細胞極化情況影響肝切除術(shù)后肝組織炎癥反應(yīng)及肝再生的作用及與鞘脂代謝的相關(guān)性展開研究,旨在為進一步研究術(shù)后肝功能不全發(fā)生發(fā)展的病理生理機制,以及為術(shù)后肝功能不全的精準防治提供新的指導思路。研究內(nèi)容和方法:1.建立小鼠骨髓來源的M1/M2極化巨噬細胞模型;2.建立小鼠肝切除后M1/M2極化巨噬細胞肝內(nèi)移植模型;3.研究巨噬細胞極化對肝切除術(shù)后炎性反應(yīng)調(diào)控及對肝再生的調(diào)節(jié)作用;4.建立鞘脂的定性定量分析方法,探討鞘脂代謝與巨噬細胞極化及肝再生的相關(guān)性。結(jié)果:1.成功建立小鼠骨髓來源的M1/M2極化巨噬細胞模型;2.成功建立小鼠肝切除并M1/M2極化巨噬細胞肝內(nèi)移植模型;3.巨噬細胞極化對術(shù)后肝炎性反應(yīng)及肝再生的調(diào)節(jié)作用:我們研究發(fā)現(xiàn)小鼠肝切除并門靜脈輸注M2型巨噬細胞可減輕術(shù)后早期的肝臟炎癥反應(yīng),并且可以促進肝再生,而M1型則相反;4.成功建立鞘脂的定性定量分析方法,初步發(fā)現(xiàn)鞘脂代謝與巨噬細胞極化及肝再生之間存在相關(guān)性。結(jié)論:通過本研究,我們發(fā)現(xiàn)巨噬細胞不同極化類型對小鼠肝切除術(shù)后肝臟炎性微環(huán)境的發(fā)生發(fā)展及肝再生的進程存在著明顯的調(diào)控作用,改變肝臟巨噬細胞極化情況可影響肝切除術(shù)后肝臟的炎性反應(yīng)及肝再生的發(fā)生發(fā)展:巨噬細胞的M2向極化可以明顯抑制肝切除術(shù)后早期的肝組織炎癥反應(yīng),并對肝再生有促進作用,而M1向極化則有著相反的作用。成功建立鞘脂定性定量分析方法并初步發(fā)現(xiàn)鞘脂代謝與巨噬細胞極化及肝再生之間存在相關(guān)性。綜上,這些研究對進一步研究肝切除術(shù)后肝功能不全甚至肝功能衰竭的病理病生機制及防治提供實驗思路與方法。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R657.3
【部分圖文】：

逑要亞結(jié)構(gòu)，目前越來越多的研宄己表明鞘脂密切參與細胞的增殖、凋亡等生命逡逑活動并與多種疾病相關(guān)（如圖１－２），為鞘脂代謝在各種疾病的生理病理學研究逡逑提供重要的理論依據(jù)［３８］。逡逑Ｉｎｄｕｃｅｒｓ邋ＵＶ邋ｒａｄｉａｔｉｏｎ邐Ｈｅａｔ邋ｓｔｒｅｓｓ邐Ｇｒｏｗｔｈ邋ｆａｃｔｏｒｓ邋（ＰＤＧＦ，邋ＩＧＦ．邋ＶＥＧＦ）逡逑Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ邐ＵＶ邋ｒａｄｉａｔｉｏｎ邐Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ邋（ＴＮＦ．邋ＩＬ－１）逡逑Ｄｅａｔｈ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ邐Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ邐Ｈｙｐｏｘｉａ逡逑邐１邋Ｄｅａｔｈ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ邋Ｆｃ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ逡逑邐邋ｏｘＬＤＬ邋ｉｍｍｕｎｅ邋ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ逡逑ＳＰＴ逡逑Ｃｅｒａｍｉｄｅ逡逑ｓｙｎｔｈａｓｅ逡逑ｗ邐ｗ邐”逡逑Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ邐＾邐？邋Ｃｅｒａｍｉｄｅ邋ＣＤａｓｅ邋＾邋Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ邐＿＿—＿Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ逡逑（３０，０００）邐（３

獲取骨髓細胞加入含有Ｌ９２９細胞培養(yǎng)上清的ＢＭＤＭ培養(yǎng)基后，于光鏡下逡逑觀察細胞形態(tài)變化。培養(yǎng)第３天，可見骨髓中單？核細胞部分己成功向巨噻細胞逡逑分化（如圖２－丨）；培養(yǎng)第４天，巨噬細胞標志物Ｆ４／８０熒光染色顯示（９７．６±１．２５％，逡逑實驗重復３次）的細胞分化為巨噬細胞（如圖２－２）。逡逑■釅邐■■逡逑圖２－１：培養(yǎng)第１天及第３天巨噬細胞形態(tài)圖２－２：巨噬細胞標志物Ｆ４／８０熒光染色逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１：邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ＢＭＤＭ邋ｏｎ邐Ｆｉｇｕｒｅ２－１：邋Ｔｈｅ邋Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｏｆ逡逑ｄａｙ邋１邋ａｎｄ邋ｄａｙ邋３邐ＢＭＤＭ邋ｓｉｇｎａｔｕｒｅ邋Ｆ４／８０逡逑２．４．２邋ＦNB；ＦＰ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染情況：逡逑將ＥＧＦＰ質(zhì)粒丨瞬T轉(zhuǎn)染到ＢＭＤＭ中４８ｈ后于熒光顯微鏡ｆ觀察，可見熒光逡逑表達ＢＭＤＭ占（７６．５０±２．０１％，實驗重復３次）（如圖２－３）。逡逑圖２－３：邋ＥＧＦＰ質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－３：邋Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＥＧＦＰ邋ｐｌａｓｍｉｄｓ逡逑１３逡逑

獲取骨髓細胞加入含有Ｌ９２９細胞培養(yǎng)上清的ＢＭＤＭ培養(yǎng)基后，于光鏡下逡逑觀察細胞形態(tài)變化。培養(yǎng)第３天，可見骨髓中單？核細胞部分己成功向巨噻細胞逡逑分化（如圖２－丨）；培養(yǎng)第４天，巨噬細胞標志物Ｆ４／８０熒光染色顯示（９７．６±１．２５％，逡逑實驗重復３次）的細胞分化為巨噬細胞（如圖２－２）。逡逑■釅邐■■逡逑圖２－１：培養(yǎng)第１天及第３天巨噬細胞形態(tài)圖２－２：巨噬細胞標志物Ｆ４／８０熒光染色逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１：邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ＢＭＤＭ邋ｏｎ邐Ｆｉｇｕｒｅ２－１：邋Ｔｈｅ邋Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｏｆ逡逑ｄａｙ邋１邋ａｎｄ邋ｄａｙ邋３邐ＢＭＤＭ邋ｓｉｇｎａｔｕｒｅ邋Ｆ４／８０逡逑２．４．２邋ＦNB；ＦＰ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染情況：逡逑將ＥＧＦＰ質(zhì)粒丨瞬T轉(zhuǎn)染到ＢＭＤＭ中４８ｈ后于熒光顯微鏡ｆ觀察，可見熒光逡逑表達ＢＭＤＭ占（７６．５０±２．０１％，實驗重復３次）（如圖２－３）。逡逑圖２－３：邋ＥＧＦＰ質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－３：邋Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＥＧＦＰ邋ｐｌａｓｍｉｄｓ逡逑１３逡逑

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 周航;周光紀;;肝臟固有免疫功能對肝再生的影響[J];解放軍醫(yī)學雜志;2015年09期

2 王改平;李曉芳;陳莎莎;靳偉;徐存拴;;肝臟炎癥反應(yīng)與肝再生關(guān)系的研究進展[J];中國免疫學雜志;2015年08期

3 趙曉彪;明玉玲;陳平;;肝切除術(shù)后肝臟再生的研究進展[J];解放軍醫(yī)學雜志;2014年01期

4 周憲賓;姚成芳;;巨噬細胞M1/M2極化分型的研究進展[J];中國免疫學雜志;2012年10期

本文編號：2826430