發(fā)布時(shí)間：2020-08-02 21:10

【摘要】：目的:檢測骨肉瘤組織標(biāo)本及細(xì)胞株中miRNA-140的表達(dá)情況,探討miRNA-140對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞侵襲的影響及其調(diào)控作用的分子機(jī)制。方法:臨床上收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院和江西省腫瘤醫(yī)院40例骨肉瘤組織標(biāo)本,采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的方法檢測所收集到的組織標(biāo)本和骨肉瘤細(xì)胞株(U2OS)中miR-140的表達(dá)。用脂質(zhì)體法將miR-140mimic(模擬物)和si-HDAC4轉(zhuǎn)染至U2細(xì)胞中;實(shí)驗(yàn)設(shè)置為轉(zhuǎn)染組、NC組和Blank組,RT-PCR檢測miR-140和HDAC4核酸水平,Western blot檢測HDAC4及HIF-1的蛋白水平表達(dá);CCK-8法檢測增殖,流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡,Transwell小室檢測侵襲。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證HDAC4是否為miR-140的靶基因。結(jié)果:40對骨肉瘤組織標(biāo)本中有29例骨肉瘤組織中miR-140的表達(dá)明顯低于與之其對應(yīng)的瘤旁組織(P0.05)。轉(zhuǎn)染miR-140組的U2細(xì)胞中miRNA-140的表達(dá)水平明顯升高,HDAC4的表達(dá)下降(P0.05)。轉(zhuǎn)染miR-140組的U2細(xì)胞增殖能力明顯下降,凋亡率增加,侵襲能力下降(P0.05);螢光素酶驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HDAC4是miR-140的一個(gè)靶基因。轉(zhuǎn)染si HDAC4片段后U2細(xì)胞中HDAC4的表達(dá)明顯降低(P0.05)。si HDAC4后U2細(xì)胞增殖能力下降(P0.05),凋亡率增加(P0.05),侵襲力減弱(P0.05)。si-HDAC4能夠明顯降低HDAC4以及下游基因HIF-1的表達(dá)。結(jié)論:骨肉瘤組織中miR-140的表達(dá)降低;HDAC4是miR-140的一個(gè)靶基因,MiR-140可抑制U2細(xì)胞的惡性表型。miR-140能靶向抑制HDAC4的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R738.1
【圖文】：

圖 1 miR-140 在骨肉瘤組織及其對應(yīng)瘤旁組織的表達(dá).*P<0.053.2 MiR-140 mimic 轉(zhuǎn)染后 U2 細(xì)胞中 miRNA-140 的表達(dá)。轉(zhuǎn)染 miR-140 mimics 24 小時(shí)后，通過實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測各組細(xì)胞中miR-140 的表達(dá)結(jié)果如圖 2 顯示：轉(zhuǎn)染組 miR-140 的表達(dá)量明顯高于其他兩組（P<0.05）。

T-PCR 檢測 miR-140 mimic 轉(zhuǎn)染后 U2 細(xì)胞中 miR-140 的表達(dá). miR-140 mimic 對骨肉瘤細(xì)胞系增殖的影響 增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染 48 h 和 72h 時(shí)，miR-140 mim較其他兩組均明顯下降（P＜0.05）,（圖 3）。

2 RT-PCR 檢測 miR-140 mimic 轉(zhuǎn)染后 U2 細(xì)胞中 miR-140 的表達(dá).*P達(dá) miR-140 mimic 對骨肉瘤細(xì)胞系增殖的影響-8 增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染 48 h 和 72h 時(shí)，miR-140 mimic 力較其他兩組均明顯下降（P＜0.05）,（圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2779069