【摘要】：目的:炎癥反應(yīng)引起的繼發(fā)性損傷可加重創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)后神經(jīng)元的死亡。G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)具有神經(jīng)保護(hù)作用,激活GPER可以減少神經(jīng)元的凋亡,但對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞功能的影響目前尚不清楚。本研究擬檢測(cè)GPER激動(dòng)劑G1對(duì)不同性別TBI大鼠損傷周圍區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞活化狀態(tài)的影響,探討不同雌激素水平條件下G1對(duì)神經(jīng)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其信號(hào)機(jī)制。方法:SD雄性大鼠、雌性大鼠和去卵巢雌性(OVX)大鼠采用Feeney's自由落體法建立中度創(chuàng)傷性腦損傷模型,假手術(shù)組僅去骨瓣。術(shù)前30分鐘對(duì)側(cè)側(cè)腦室注射G1或者等量體積的溶劑。檢測(cè)指標(biāo)主要包括M1型小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞標(biāo)志物 IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、CD32),M2 型標(biāo)志物(IL-1、Arg1、CD206)。(1)在損傷后6小時(shí)、1天、3天ELISA法檢測(cè)炎癥因子IL-1β、IL-6、TTF-α和IL-10的變化,western blot檢測(cè)iNOS、Arg1、CD206、C、32變化,分析腦損傷后的炎癥反應(yīng)是否具有性別差異;(2)G1處理組大鼠,損傷后1d檢測(cè)炎癥因子表達(dá)的變化,損傷后3天免疫熒光檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的極化情況,分析G1對(duì)炎癥反應(yīng)的作用是否具有性別差異;(3)western blot檢測(cè)不同性別大鼠GPER的基礎(chǔ)表達(dá)及損傷后的表達(dá)變化,比較OVX大鼠在補(bǔ)充雌激素前后GPER及炎癥因子表達(dá)的變化,進(jìn)一步闡明不同雌激素水平對(duì)G1調(diào)節(jié)炎癥作用的影響;(4)western blot檢測(cè)損傷后Akt、ERK磷酸化的變化,初步闡明G1調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的機(jī)制。結(jié)果:1.TBI大鼠損傷周圍區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)無(wú)性別差異:雄性、正常雌性、去卵巢雌性大鼠腦組織IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10基礎(chǔ)表達(dá)無(wú)差異;損傷后炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10)、Arg1/iNOS均增加,但下降較快,表面標(biāo)志物CD32、CD206增高持續(xù)至第3天。2.G1抑制雄性和去卵巢雌性大鼠損傷后炎癥因子表達(dá),升高Arg1/iNOS,增加Iba1+CD206+細(xì)胞,減少Iba1+CD32+細(xì)胞;G1增加正常雌性大鼠損傷后炎癥因子表達(dá),降低Arg1/iNOS,減少Iba1+CD206+細(xì)胞,表明G1在雄性和去卵巢雌性TBI大鼠中發(fā)揮抗炎作用,在正常雌性TBI大鼠中起促炎作用。3.正常雌性大鼠GPER基礎(chǔ)表達(dá)水平高于雄性和去卵巢雌性大鼠,損傷后雄性和去卵巢雌性大鼠GPER表達(dá)一過(guò)性增加,正常雌性大鼠GPER表達(dá)不增加;補(bǔ)充雌激素后,去卵巢雌性大鼠GPER表達(dá)增高,且G1促炎作用消失。4.TBI大鼠損傷后p-Akt減少、p-ERK增加;在雄性和去卵巢雌性大鼠中,G1處理后p-Akt增加,p-ERK減少,雌性大鼠G1處理后p-Akt、p-ERK無(wú)明顯變化。結(jié)論:1.G1對(duì)TBI大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞極化的作用具有性別差異;2.G1調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的性別差異與不同雌激素水平下GPER表達(dá)差異有關(guān);3.AKT和ERK信號(hào)通路可能參與G1對(duì)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R651.15
【圖文】：

現(xiàn)出相似的變化：腦損傷后第１天，促炎因子ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｏｕ抗炎因子逡逑ＩＬ－１０均明顯增高，腦損傷后第３天ＩＬ－ｌｐ仍高于假手術(shù)組，但ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｃｔ、ＩＬ－１０逡逑與假手術(shù)組無(wú)差異（圖１）。這些結(jié)果提示：ＴＢＩ后炎癥因子表達(dá)很快增加，但逡逑這種變化不具有性別差異，不受雌激素水平高低的影響。逡逑ｓｈａｍ邋Ｉｄ邋３ｄ逡逑□邋Ｈ邋■逡逑＊逡逑３００邋＂１邋Ｉ邋＊邐ｉ邐２００邐＊＊逡逑ｌ邋．邋１邐ｆ邋ｉ邐１．５０－邐１邐＾邐ｉ逡逑ｆ：：［ｌＬｊｌＪｉ邋ｌ：ｌｎｌｌ邋ｎｉｌ邋Ｊｉ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍｌａｅ邐ＯＶＸ邐ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ逡逑＾邋９０１邋＾邐６００邐１邐＊邐ｒ＂７逡逑＾ｉｌｉｌｉＡ邋�。海荩荩欤戾澹欤戾澹欤殄义希恚幔欤暹姡妫澹恚幔欤暹姡希郑剡姡恚幔欤暹姡妫澹恚幔剩暹姡希郑劐义蠄D１邋ＴＢＩ大鼠損傷周圍區(qū)腦組織炎癥因子的動(dòng)態(tài)變化（＊ｐ＜０．０５，邋＊＊／？＜０．０１）逡逑１５逡逑

顯著升高（ｍａｌｅ組６ｈ開始升高），且持續(xù)升高至第３天；腦損傷后Ａｒｇｌ表達(dá)增逡逑加早于ｉＮＯＳ，在ＴＢＩ后６ｈ即升高，持續(xù)至第１天，但３天時(shí)表達(dá)下降，降至基逡逑礎(chǔ)水平（ＯＶＸ組仍高于基礎(chǔ)水平）（圖２Ａ和２Ｂ）。Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ比值分析結(jié)果顯逡逑示：損傷后６小時(shí)Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ增高，損傷后第１天降至基礎(chǔ)水平，損傷后第３逡逑天比值顯著降低（圖２Ｃ）。Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ增高提示ＮＯ合成減少，Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ降低逡逑提示ＮＯ合成增加，因此腦損傷第１天時(shí)腦組織ＮＯ合成減少，第３天ＮＯ合成逡逑增加。研宄結(jié)果顯示：ＴＢＩ后Ａｒｇｌ表達(dá)增加早于ｉＮＯＳ，Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ先升高后降逡逑低，這些變化不具有明顯的性別差異，不同雌激素水平對(duì)這些指標(biāo)也無(wú)明顯影響。逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ逡逑Ａ逡逑ｉＮＯＳ邐ｗｍｍ邋ｍｍｍ邋－邐ｍｍｍ邋ｍｍ邋＾邋ｍｍｍ邋ｍｍ邋ｍｍｍ逡逑１邐＇？ＰＷｉｉｉＰ＇邐ｔＭｘａｗｗＭ＊＇＇邐ＶＨＭＨＰ逡逑ＧＡＰＤＨ邋ｍｍｍ邋ｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍ邐ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ＇逡逑ｓｈａｍ５Ｉｉ邋ｉｄ邋３ｄ￣邋ｓｈａｍ邋６ｈ邋Ｔ３邋Ｍ邋ｓＨａｍ５Ｈ邋Ｔ３邋５３￣逡逑Ｂ邋＝４－｜邐＾３－ｊ邐Ｍｉ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ邐ｍａｌｅ邋ｆｅｍａｌｅ邋ＯＶＸ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ逡逑圖２邋ＴＢＩ大鼠損傷周圍區(qū)腦組織ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ的表達(dá)變化。Ａ：Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢逡逑測(cè)損傷周圍區(qū)ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ蛋白，Ｂ：ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ相對(duì)表達(dá)量的分析，逡逑Ｃ：邋ｉＮＯＳ／Ａｒｇｌ邋的比值分析。（＊ｐ＜０．０５

圖３邋ＴＢＩ大鼠ＴＢ丨損傷周圍區(qū)腦組織ＣＤ３２和ＣＤ２０６表達(dá)變化。Ａ：Ｗｅｓｔｅｍ邋ｂｌｏｔ逡逑檢測(cè)損傷周圍區(qū)皮層ＣＤ２０６和ＣＤ３２蛋白，Ｂ：邋ＣＤ２０６和ＣＤ３２定量分析平逡逑（＊ｐ＜０．０５，邋＊＊ｐ＜０．０＼）逡逑

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本文編號(hào)：2775976