【摘要】：目的研究NLRP3炎癥小體及相關炎癥因子在全身型幼年特發(fā)性關節(jié)炎(systemic juvenile idiopathic arthritis,SJIA)中的作用機制。方法收集2016年3月到2017年10月在我科住院的SJIA患兒33例,以及同時期年齡、性別匹配的非炎癥兒童28例。收集SJIA患兒三個時間點:治療前[SJIA(0W)]、治療后2周[SJIA(2W)]、治療后8周[SJIA(8W)]以及對照組PBMC,采用QRT-PCR方法測定細胞裂解物中NLRP3 mRNA、ASCmRNA和IL-1βmRNA的轉(zhuǎn)錄水平;Western Blot法測定上清液和細胞裂解物中NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β等蛋白表達水平;ELISA法測定上清液中細胞因子IL-1β和IL-18的濃度,Person分析IL-1β,IL-18 和 IL-6 與 WBC、PLT、Hb、CRP 以及 ESR 的相關性。結(jié)果與對照組比較,SJIA(OW)組PBMC培養(yǎng)基上清液中IL-1β和IL-18的濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05);PBMC細胞裂解物中NLRP3蛋白表達水平明顯降低,IL-1β蛋白表達水平明顯升高,而caspase-1蛋白表達水平未見明顯差異;PBMC細胞裂解物中NLRP3mRNA、ASCmRNA的轉(zhuǎn)錄水平未見明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(均P0.05)。與SJIA(OW)組比較,SJIA(2W)組PBMC培養(yǎng)基上清液中IL-1β和IL-18的濃度明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(均P0.05);PBMC細胞裂解物中NLRP3蛋白表達水平明顯升高,IL-1β蛋白表達水平明顯降低,而caspase-1蛋白表達水平未見明顯差異;PBMC細胞裂解物中NLRP3mRNA的轉(zhuǎn)錄水平差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。與SJIA(OW)組比較,SJIA(8W)組PBMC培養(yǎng)基上清液中IL-18的濃度明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但IL-1β濃度差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。PBMC細胞裂解物中NLRP3蛋白表達水平未見明顯變化,IL-1β蛋白表達水平明顯降低,而caspase-1蛋白表達水平未見明顯差異(均 P0.05)。SJIA(0W)組患兒 IL-1β 與 WBC、Hb、血小板、CRP 和 ESR的相關性分析均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。IL-18和IL-6與ESR呈正相關,且具有統(tǒng)計學意義(r=0.787,P=0.032;r=0.362,P=0.042);IL-18 和 IL-6 與 Hb 呈負相關(r =-0.709,P0.05;r =-0.434,P=0.013)。結(jié)論SJIA(0W)組PBMC培養(yǎng)上清液中IL-1β和IL-18濃度明顯高于對照組,而NLRP3蛋白表達明顯減低;SJIA患兒治療后IL-1β和IL-18濃度明顯降低,而NLRP3蛋白表達明顯升高,推測IL-1β和IL-18在SJIA炎癥機制中起重要作用,但NLRP3炎癥小體信號通路并不參與IL-1β和IL-18的調(diào)控,其在SJIA的作用尚有待進一步研究。外周血IL-1β和IL-18水平可能成為疾病活動的監(jiān)測指標。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R726.8
【圖文】：

文位于羧基端的ＰＹＤ，通過與ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３的ＰＹＤ氨基端的ＣＡＲＤ，通過ｃａｓｐａｓｅ－１的ＣＡＲＤ結(jié)構域相結(jié)布于人體的單核細胞和巨噬細胞核中，當有病原體入侵胞質(zhì)中，且對炎癥小體的激活起到重要的作用【９〗。但也活化過程中ＡＳＣ不是必需的，但是能夠增強其活ｏ－ｃａｓｐａｓｅ－ｌ的活化形式，最早是在研究細胞調(diào)亡的過程通常以無活性的酶原形式存在，一旦被激活，能夠裂解Ｉ家族細胞因子的前體，使其轉(zhuǎn)化為成熟的丨Ｌ－丨、１Ｌ－１８、Ｉ疫中。（ＮＬＲＰ３炎癥小體結(jié)構示意圖如下）逡逑

逡逑組患兒治療前后不同時間點外周血細胞ＪＩＡ（ＯＷ）邐ＳＪ１Ａ（２Ｗ）（１．２－１７７．７）邐２．６（１．３－５）＊．５１邋土０．３８邐２．６３±０．２１２６．８±Ｉ６３邐１９５．８±５８．４（１．８－１４４．１）邐３．７５（２」－１５．３）＊．０９邋土邋１．３２邐２．７２±０．７４６．１（１．３－１３０８．２）邐４（１－９）°ＪＩＡ患兒血清中細胞因子ＩＬ－ｉｐＳＪＩＡ（ＯＷ）血清中ＩＬ－ｉｐ濃度低，且兩ａ＞ｒｓ逡逑

法檢測ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ和丨Ｌ－ｌｐｍＲＮＡ表達水平，結(jié)果顯示：與對照組（ｃｏｎｔｒｏｌ組）逡逑比較，ＳＪＩＡ（ＯＷ）組中ＮＬＲＰ３ｍＲＮＡ、ＡＳＣｍＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄水平未見明顯變化，差異逡逑無統(tǒng)計學意義（均Ｐ＞0．0５）（見圖３．２Ａ和Ｂ），丨Ｌ－ｌｐｍＲＮＡ的轉(zhuǎn)錄水平顯著升逡逑高（Ｐ＜０．０５）（見圖邋３．２Ｃ）。與邋ＳＪＩＡ（ＯＷ）組比較，ＳＪ［Ａ（２Ｗ）組中邋ＮＬＲＰ３邋ｍＲＮＡ逡逑的轉(zhuǎn)錄水平差異無統(tǒng)計學意義（＆０．０５）（見圖３．２Ａ）。逡逑ｌｉ－ｎｉ邋４－邐＿逡逑、。丨丨，１＿丨，丨邋■丨＿逡逑ｉｌ］逡逑ＣＸ0Ｊ邋邋１邋邋＾＿＿逡逑圖３．２對照組和ＳＪＩＡ患兒不同時間點ＰＢＭＣ通過５００邋ｎｇ／ｍｌ邋ＬＰＳ預處理６小時，逡逑隨后加入Ｔｒｉｚｏ丨試劑（１ｍｌ）裂解細胞，通過ｑＲＴ－ＰＣＲ法檢測ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ和ＩＬ－ｌｐ逡逑ｍＲＮＡ表達水平。逡逑３．４對照組和ＳＪＩＡ患兒不同時間點ＰＢＭＣ刺激后上清液中細胞逡逑因子ＩＬ－ｉｐ和１Ｌ－１８的濃度逡逑對照組和ＳＪＩＡ患兒不同時間點ＰＢＭＣ經(jīng)第一信號ＬＰＳ邋（５００邋ｎｇ／ｍｌ）預處理逡逑６１ｉ，之后加入第二信號ｎｉｇｅｒｉｃｉｎ（１０（ｉＭ），可促

本文編號：2769658