【摘要】：【背景】據(jù)美國癌癥協(xié)會最新流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,乳腺癌發(fā)病率居女性惡性腫瘤首位。人表皮生長因子受體2(英文名為Human epidermal growth factor receptor-2,英文簡稱為HER2)在約20%~25%乳腺癌患者中過度表達,與疾病進展及預(yù)后密切相關(guān),是乳腺癌治療的重要靶點之一。HER2靶向藥物—曲妥珠單抗(Trastuzumab,商品名Herceptin,赫賽汀)在乳腺癌治療中具有較大的臨床獲益。最近的研究發(fā)現(xiàn)非編碼RNA在調(diào)控腫瘤耐藥方面發(fā)揮重要作用。微小RNA(miRNA)通過靶向降解靶mRNA調(diào)控基因表達。我們連續(xù)的研究表明,miR-200c(Bai et al,Int J Cancer,2014)、miR-221(Ye et al,BMB Rep,2014)和miR-375(Ye et al,BMC Cancer,2014)等廣泛參與乳腺癌HER2靶向治療的耐藥調(diào)控。這些結(jié)果說明miRNA在乳腺癌HER2靶向治療耐藥中扮演重要角色。然而,miRNA僅僅是轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)的一個作用環(huán)節(jié),并不能完全解釋乳腺癌HER2靶向治療耐藥相關(guān)基因的異常表達。近年來,長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)被證明在多種疾病中調(diào)控基因異常表達,且與腫瘤細胞增殖、遷移、血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移和抗腫瘤藥物耐藥性有關(guān)。然而,是否有與曲妥珠單抗耐藥有關(guān)的LncRNA同時調(diào)控細胞惡性轉(zhuǎn)化?LncRNA與miRNA以及靶基因的mRNA如何相互作用?這些RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)又是如何參與乳腺癌耐藥?這些問題目前仍未闡明。瘢痕疙瘩是一種皮膚良性腫瘤,其特征是成纖維細胞過度生長和膠原過度沉積在受損傷的皮膚細胞外基質(zhì)中。許多研究表明PPAR-γ激動劑在腎臟、肝臟、胰腺和肺部具有抗纖維化作用,表明PPAR-γ激動劑可能成為一種有前途的控制纖維化疾病的藥物。人工合成的PPAR-γ激活劑,如曲格列酮等能激活PPAR-γ。PPAR-γ是核受體,能夠與靶基因的DNA上的過氧化物酶體增殖激素應(yīng)答元件(PPRE)結(jié)合激活轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)節(jié)多種生理現(xiàn)象。然而,盡管我們認識到PPAR-γ激動劑抗纖維化的功能,但是在瘢痕疙瘩成纖維細胞中PPAR-γ激動劑抗纖維化作用的分子機制仍有待確定。研究顯示,部分微小RNA(miRNA)具有調(diào)控纖維化的作用。我們連續(xù)的研究表明,miR-21和miR-145廣泛參與皮膚纖維化進程。然而,是否有與PPAR-γ激動劑治療抗纖維化作用有關(guān)的miRNA參與瘢痕發(fā)生?PPAR-γ激動劑如何在瘢痕疙瘩中調(diào)控miRNA?miRNA以及靶基因又是如何參與PPAR-γ激動劑拮抗瘢痕疙瘩成纖維細胞膠原生成?這些問題亟需解答�！灸康摹客ㄟ^本研究的實施,鑒定乳腺癌曲妥珠單抗耐藥細胞中與耐藥相關(guān)的長鏈非編碼RNA,并篩選出受到該長鏈非編碼RNA調(diào)控的miRNA分子以及靶基因,進而從LncRNA“海綿吸附”miRNA的機制出發(fā),探討長鏈非編碼RNA在乳腺癌耐藥過程中的功能,并為乳腺癌治療提供新的靶點分子和策略。通過本研究的實施,驗證PPAR-γ激動劑抑制瘢痕疙瘩膠原合成的現(xiàn)象,并篩選出受到PPAR-γ激動劑調(diào)控的miRNA分子及其靶基因,探討靶基因Egr1對膠原生成的影響,并為瘢痕疙瘩治療提供新的候選靶點。【方法】1.采用qRT-PCR分析UCA1、miR-18a和YAP1的表達;2.通過細胞增殖實驗分析UCA1對曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞增殖的影響,并測定曲妥珠單抗半數(shù)致死濃度;3.通過流式細胞術(shù)凋亡分析檢測UCA1對曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞凋亡的影響;4.通過Transwell細胞侵襲實驗分析UCA1對曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞侵襲能力的影響;5.生物信息學(xué)方法預(yù)測UCA1和miR-18a、miR-18a和YAP1的結(jié)合位點;6.利用熒光素酶報告基因?qū)嶒灧治鯱CA1和miR-18a、miR-18a和YAP1的結(jié)合情況;7.采用生物素下拉實驗檢測UCA1和miR-18a相互結(jié)合;8.采用瞬時轉(zhuǎn)染分析干涉UCA1、miR-18a和YAP1的表達對上下游基因表達的影響。1.采用qRT-PCR分析Egr1、miRNA和Col1的表達;2.通過蛋白印跡和酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測Egr1和Col1蛋白含量;3.通過免疫組化實驗檢測瘢痕疙瘩與正常皮膚組織中Egr1的表達;4.通過miRNA芯片高通量篩選PPAR-γ激動劑處理后瘢痕疙瘩成纖維細胞的miRNA表達譜,篩選出能夠調(diào)控膠原的miRNA分子(miR-543);5.通過瞬時轉(zhuǎn)染檢測miRNA對膠原分泌的影響;6.通過染色質(zhì)免疫沉淀實驗檢測PPAR-γ在miR-543啟動子區(qū)的結(jié)合;7.生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-543啟動子區(qū)的過氧化物酶體增殖激素應(yīng)答元件序列,以及miR-543和Egr1的結(jié)合位點;8.利用熒光素酶報告基因?qū)嶒灧治鰉iR-543和Egr1結(jié)合情況�！窘Y(jié)果】1.qRT-PCR結(jié)果顯示,長鏈非編碼RNA-UCA1在曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞中表達升高;2.UCA1干涉結(jié)果顯示,干涉后長鏈非編碼RNA-UCA1在曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞中顯著降低;3.細胞增殖實驗和細胞侵襲實驗的結(jié)果顯示,UCA1干涉顯著降低曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞增殖和侵襲能力;4.生物素RNA下拉結(jié)果顯示,UCA1和miR-18a在曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌SKBR3細胞中相互結(jié)合;5.生物信息學(xué)分析和熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實UCA1能“海綿吸附”miR-18a,并且這種吸附作用依賴兩者的結(jié)合位點;6.qRT-PCR結(jié)果顯示,降低UCA1能顯著升高miR-18a的水平,而升高的miR-18a抑制YAP1的表達;7.生物信息學(xué)分析和熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實,miR-18a能靶向抑制YAP1,并且這種抑制作用依賴于兩者的結(jié)合位點;8.qRT-PCR和蛋白印跡實驗結(jié)果顯示,降低UCA1和YAP1能顯著抑制促細胞分裂的分子的表達,提高促藥物敏感性蛋白的表達量;9.干涉UCA1實驗發(fā)現(xiàn),在miR-18a干涉的條件下,UCA1不能對miR-18a下游基因進行調(diào)控。1.qRT-PCR結(jié)果顯示,在瘢痕疙瘩成纖維細胞中,Egr1和Col1在接受PPAR-γ刺激下降低,而miR-543表達升高;2.蛋白印跡和酶聯(lián)免疫吸附實驗顯示,Egr1和Col1蛋白表達水平一致;3.miRNA芯片結(jié)果顯示,miR-543等miRNA在瘢痕疙瘩成纖維細胞中表達異常,qRT-PCR證實了芯片檢測結(jié)果;4.生物信息學(xué)結(jié)果顯示,miR-543啟動子區(qū)有過氧化物酶體增殖激素應(yīng)答元件序列,在Egr1的3’UTR區(qū)有miR-543的候選結(jié)合位點;5.熒光素酶報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果顯示,miR-543能結(jié)合Egr1的3’UTR;6.qRT-PCR實驗結(jié)果顯示,Egr1在曲格列酮刺激和miR-543抑制物同時作用時升高,在PPAR-γ抑制物和miR-543模擬物同時作用時降低;7.酶聯(lián)免疫吸附實驗結(jié)果顯示,Col1蛋白表達變化和Egr表達變化一致。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

空軍軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文2 下游途徑失活[40]。另外，阻斷 HER2 / HER3 / PI3K 復(fù)合物形成和下t 信號傳遞是曲妥珠單抗抑制腫瘤細胞增殖的關(guān)鍵分子機制（圖 1）[4珠單抗治療，腫瘤細胞在細胞周期的 G1 / S 期停滯，并伴隨著 p27 水細胞周期蛋白 D1 的降低[42]。當單一應(yīng)用于體外實驗中時，曲妥珠單胞凋亡[43]。當曲妥珠單抗與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用時，這種協(xié)同效應(yīng)可以 / Akt 信號傳導(dǎo)途徑抑制腫瘤細胞生長。在誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的抗腫相關(guān)研究顯示曲妥珠單抗能夠介導(dǎo)免疫應(yīng)答，例如抗體依賴性細胞毒）和補體依賴性細胞毒性[44]。在 ADCC 中，表達 Fc 受體的免疫效應(yīng)G1 抗體（曲妥珠單抗）的 Fc 結(jié)構(gòu)域結(jié)合，隨后裂解與抗體相連的細細胞）。Gennari 等學(xué)者發(fā)現(xiàn)曲妥珠單抗治療后的腫瘤樣品中淋巴樣，證實了曲妥珠單抗在乳腺癌患者中介導(dǎo) ADCC 的作用[45]。

R 是一種受體酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinase, RTK），是 PI3因素。Lu 等學(xué)者報道，過度表達 HER2 和 IGF-1R 的細胞（MCF顯示出對曲妥珠單抗的耐藥性（圖 2），若用抗體阻斷 IGF-1R，例，能夠抵消該細胞的耐藥性[48]。Lu 等學(xué)者隨后也報道了 IGF-1 信 的表達水平，證實 SKP2 是 p27 的泛素連接酶，能夠增強 SKP2 與們課題組前期研究顯示，IGF-1R 在曲妥珠單抗耐藥的乳腺癌 SK達。若干涉 IGF-1R，曲妥珠單抗耐藥細胞藥物敏感性增強[13]。這用 IGF-1R 的抑制劑 -IR3，可提高曲妥珠單抗耐藥細胞的藥物敏rega 等學(xué)者發(fā)現(xiàn)過表達 TGF- （Transforming growth factor- ，轉(zhuǎn)化胞對曲妥珠單抗可產(chǎn)生耐藥性。Valabrega 收集了曲妥珠單抗治療情進展的乳腺癌患者的腫瘤樣品，并對其 TGF- 表達水平進行了顯示，在治療前檢測不到 TGF- 表達，但在治療后出現(xiàn)病情進展 TGF- 表達顯著升高[50]。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳世靈;張勤勇;;某院2015-2016年曲妥珠單抗應(yīng)用分析[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2017年68期

2 佚名;;什么情況下可以使用曲妥珠單抗?[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2018年02期

3 趙冬梅;陳靜;李晶;陳姝羽;吉鐵鳳;;注射用曲妥珠單抗安全輸注問題與建議[J];武警醫(yī)學(xué);2016年10期

4 任重陽;;老年早期乳腺癌輔助曲妥珠單抗的持續(xù)時間和心臟事件[J];循證醫(yī)學(xué);2014年02期

5 向純明;;曲妥珠單抗引起多重不良反應(yīng)1例報告[J];中國實用醫(yī)藥;2012年27期

6 王璐;武貴存;魏長宏;王作志;;曲妥珠單抗治療乳腺癌致精神癥狀1例報告[J];山東醫(yī)藥;2011年49期

7 胡夕春;王佳蕾;;曲妥珠單抗(赫賽汀)最新臨床研究進展[J];臨床藥物治療雜志;2004年06期

8 洪亮;;接受曲妥珠單抗治療的女性要密切隨訪[J];心血管病防治知識(科普版);2011年11期

9 郭艷麗;薛劍;李軍;鄭本獻;馮霞;張孝忠;;超敏肌鈣蛋白I和N末端B型鈉尿肽原對曲妥珠單抗致心臟毒性的預(yù)測價值[J];武警醫(yī)學(xué);2017年08期

10 劉寶利;鄭守華;陳楠;李虹;張婧;周巖;劉曉舟;;注射用曲妥珠單抗計算量表的設(shè)計與應(yīng)用[J];護理研究;2014年13期

相關(guān)會議論文 前10條

1 趙冬梅;;細節(jié)管理在注射用曲妥珠單抗安全輸注中的應(yīng)用[A];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報2016/專集：國際數(shù)字醫(yī)學(xué)會數(shù)字中醫(yī)藥分會成立大會暨首屆數(shù)字中醫(yī)藥學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2016年

2 樊蘊莉;張琳;;曲妥珠單抗治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的護理[A];中華護理學(xué)會全國腫瘤護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2010年

3 馬飛;李俏;李慧慧;袁們;王佳玉;樊英;徐兵河;;曲妥珠單抗治療拉帕替尼耐藥乳腺癌的臨床價值[A];中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)分會第七屆全國中青年腫瘤學(xué)術(shù)會議——中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

4 王春暉;李靜;吳薇;李文思;李曉宇;呂遷洲;;曲妥珠單抗治療HER2陽性腫瘤患者的心臟安全性評價[A];第七屆中國藥學(xué)會醫(yī)院腫瘤藥學(xué)大會論文集[C];2018年

5 董國雷;佟仲生;李軍楠;于洋;;重組人血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合曲妥珠單抗對Her-2過表達[A];第八屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第十三屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

6 楊秀娟;王黎青;王勇;;1例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者曲妥珠單抗耐藥后的用藥分析[A];中華醫(yī)學(xué)會臨床藥學(xué)分會2014年全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

7 王曉稼;;HER-2陽性乳腺癌曲妥珠單抗耐藥機制研究進展[A];2013華東胸部腫瘤論壇暨第六屆浙江省胸部腫瘤論壇論文集[C];2013年

8 胡偉國;;從國際最新進展看國內(nèi)抗HER2治療的現(xiàn)狀與發(fā)展[A];湖北省抗癌協(xié)會青年委員會第五屆青年學(xué)術(shù)論壇資料匯編[C];2013年

9 董良;李海金;;乳腺癌新型分子靶向藥物治療研究進展[A];2013年第六屆國家級分子靶點藥物治療新進展學(xué)習(xí)班暨浙江省腫瘤化療學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

10 張童童;李青;;乳腺癌抗HER-2耐藥后的治療策略[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 本報記者 戴小河;生物類似藥研發(fā)呈蓬勃之勢[N];中國證券報;2017年

2 駐京記者 賈巖;曲妥珠單抗能做得更多[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

3 張驍;束梅英;曲妥珠單抗治療乳腺癌研究[N];中國醫(yī)藥報;2004年

4 麥迪信醫(yī)學(xué)出版有限公司供稿;用得準 好藥才見良效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

5 聞聲;曲妥珠單抗可用于乳癌輔助治療[N];中國醫(yī)藥報;2007年

6 新汶;歐洲批準曲妥珠單抗用于早期HER2陽性乳腺癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

7 陶春祥;曲妥珠單抗治療乳腺癌[N];中國醫(yī)藥報;2002年

8 湯森路透;我國生物類似藥發(fā)展機遇與挑戰(zhàn)并存[N];中國醫(yī)藥報;2015年

9 KERRI WACHTER;赫賽汀遭遇供應(yīng)和費用難題[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2012年

10 編譯 李勇;請留意這11類生物類似藥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 朱華宇;長鏈非編碼RNA-UCA1通過miR-18a靶向YAP1調(diào)控乳腺癌曲妥珠單抗耐藥[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

2 史蛟龍;HER4-YAP1軸通過誘導(dǎo)HER2陽性胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進曲妥珠單抗的耐藥[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 趙瑋;基于真實世界數(shù)據(jù)探索抗HER2靶向治療優(yōu)選方案及耐藥機制[D];軍事科學(xué)院;2018年

4 李健斌;循環(huán)腫瘤細胞在人表皮生長因子受體2陽性乳腺癌曲妥珠單抗耐藥機制的探索性研究[D];軍事科學(xué)院;2018年

5 曹嵐清;YAP對HER2陽性乳腺癌細胞曲妥珠單抗耐藥性的影響及相關(guān)機制研究[D];吉林大學(xué);2018年

6 李曉玲;曲妥珠單抗聯(lián)合5-氟尿嘧啶和/或順鉑治療胃癌的實驗研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

7 李光超;反饋激活的STAT3通過上調(diào)MUC1和MUC4的表達介導(dǎo)曲妥株單抗耐藥[D];華南理工大學(xué);2014年

8 李瑞麟;新型抗HER2人源化抗體HuA21的抗腫瘤作用及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

9 柳萌;曲妥珠單抗聯(lián)合唑來膦酸促進Vγ9Vδ2T細胞免疫治療骨肉瘤的實驗研究[D];浙江大學(xué);2016年

10 羅波;EGFR家族成員在腫瘤細胞輻射抵抗中的作用機制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 潘淋淋;分子靶向藥物一線治療晚期HER2陽性乳腺癌的網(wǎng)狀Meta分析[D];吉林大學(xué);2018年

2 郭靜;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在胃癌曲妥珠單抗耐藥發(fā)生與傳遞中的作用及機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 姚景昊;抗HER2靶向治療不規(guī)范經(jīng)治的HER2陽性轉(zhuǎn)移性雙側(cè)乳腺癌：個案報道和文獻回顧[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2018年

4 李春蓮;RBM38通過增加HER-2的表達誘導(dǎo)乳腺癌對曲妥珠單抗敏感性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

5 楊柳婷;NRG1/HER3通路激活致HER2陽性乳腺癌曲妥珠單抗原發(fā)耐藥作用機制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

6 陳杰;曲妥珠單抗聯(lián)合奧沙利鉑對HER2陽性胃癌細胞增殖及細胞活性的影響[D];蘇州大學(xué);2017年

7 阮貝鴻;探索乳腺癌細胞系中曲妥珠單抗耐藥相關(guān)的生物標志物[D];浙江大學(xué);2016年

8 韓思奇;曲妥珠單抗與塞卡替尼在胃癌中的抗腫瘤作用及其機理研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

9 申曉倩;曲妥珠單抗誘導(dǎo)大鼠心功能降低及其機制的探討[D];山東大學(xué);2014年

10 李娟;回顧性研究曲妥珠單抗聯(lián)合化療治療HER2陽性晚期胃癌的臨床療效、安全性及治療前后HER2狀態(tài)及耐藥基因的研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2017年

本文編號：2741311