【摘要】：目的:研究將NT-3基因修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于樹枝狀兩親性肽凝膠內(nèi)部行三維培養(yǎng),大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化情況。方法:取4-6周SD大鼠無菌下分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并鑒定。以巨細(xì)胞病毒作為啟動子,構(gòu)建1個攜帶NT-3基因的腺病毒載體即AdvNT-3,表達綠色熒光。以不同感染復(fù)數(shù)(MOI值)將AdvNT-3轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,轉(zhuǎn)染2天后觀察綠色熒光蛋白表達情況確定最佳病毒感染復(fù)數(shù)。以AdvNT-3轉(zhuǎn)染大鼠骨髓干細(xì)胞即為NT-3-BMSC。1 wt%多肽溶液和細(xì)胞懸液混合,細(xì)胞分布于凝膠內(nèi)部形成三維培養(yǎng)體系。實驗分三組,A組:BMSC二維培養(yǎng)組;B組:NT-3-BMSC二維培養(yǎng)組;C組:NT-3-BMSC+凝膠三維培養(yǎng)組;三組分別于體外培養(yǎng)7天后采用免疫熒光及qPCR檢測神經(jīng)元特異性標(biāo)記物MAP-2、β-III Tubulin的表達情況。結(jié)果:分離培養(yǎng)的細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀鑒定為骨髓干細(xì)胞。病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞48h后熒光顯微鏡下觀察有綠色熒光表達,且隨著MOI值增大熒光表達越強烈,MOI=100時,熒光到達峰值,MOI為300時,顯微鏡下觀察部分細(xì)胞死亡,因此最佳MOI為100。肽溶液在DMEM/F12觸發(fā)下形成三維凝膠,肉眼觀察呈透明凝膠狀,在電鏡下觀察可見凝膠呈成三維網(wǎng)狀纖維。免疫熒光結(jié)果顯示:A組MAP-2、β-III Tubulin表達陰性,B組及C組MAP-2、β-III Tubulin均表達陽性,C組陽性率高于B組。qRCR的結(jié)果和免疫熒光的結(jié)果相同,B組、C組的神經(jīng)元特異性標(biāo)記物MAP-2、β-III Tubulin相對表達量均較A組升高,且C組的MAP-2、β-III Tubulin相對表達量均高于B組。因此經(jīng)過NT-3基因改性BMSCs在三維凝膠中培養(yǎng),能夠促進細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化,且三維培養(yǎng)優(yōu)于二維培養(yǎng)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R651.2
【圖文】：

12圖 2 流式細(xì)胞儀檢測第 3 代大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原Figure 2: Detection of 3rd Generation BMSCs Surface Antigen by Flow Cytometry注：圖中 A 所示為 CD29 陽性率 97.1%；B 為 CD44 陽性率 99.8%；C 為 CD34 陽性率 1.61 為 CD45 陽性率 1.71%。

圖 3 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂誘導(dǎo)分化能力Figure3:Rat bone marrow stem cells osteogenic, adipogenic differentiation3.4 病毒轉(zhuǎn)染最佳 MOI 值

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Zi-ang Yao;Feng-jia Chen;Hong-li Cui;Tong Lin;Na Guo;Hai-ge Wu;;Efficacy of chitosan and sodium alginate scaffolds for repair of spinal cord injury in rats[J];Neural Regeneration Research;2018年03期

2 周麗斌;徐冰心;丁瑞英;韓浩倫;王剛;李保衛(wèi);王鴻南;吳瑋;;應(yīng)用微纖維膠原支架構(gòu)建組織工程軟骨[J];中國組織工程研究;2017年22期

3 張軍;陳曉;張榮佳;曹烈虎;紀(jì)方;蘇佳燦;;脊髓損傷動物模型的研究進展[J];中華全科醫(yī)學(xué);2017年03期

4 史廷春;周陶;孫芳芳;王瑞艷;安曉;;脊髓損傷的PLGA低溫成形組織工程支架修復(fù)[J];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報;2017年01期

5 陳睿;宋玉林;汪文玉;吳凱;陳偉高;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與樹枝狀兩親性多肽自組裝凝膠支架的生物相容性[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年06期

6 張琨;馬珊珊;孟楠;邢衢;石振慶;關(guān)方霞;;海藻酸鈉濃度對新型神經(jīng)組織工程支架結(jié)構(gòu)與性能的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版);2015年04期

7 宋玉林;;Angiogenesis Induced by IKVAV-Containing Amphiphile Peptide in vivo[J];Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science Edition);2010年05期

8 宋玉林;黃華斌;鄭啟新;廖琦;;新型兩親性肽自組裝凝膠與神經(jīng)干細(xì)胞相容性研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2009年04期

9 宋玉林;;Two-dimensional Effects of Hydrogel Self-organized from IKVAV-containing Peptides on Growth and Differentiation of NSCs[J];Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science Edition);2009年02期

10 衣昕;金國華;田美玲;秦建兵;毛偉峰;;殼聚糖作載體的神經(jīng)干細(xì)胞移植修復(fù)腦損傷研究[J];中國臨床解剖學(xué)雜志;2008年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 賀清華;大鼠鼻黏膜外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的干細(xì)胞特性研究及其在治療脊髓損傷中的應(yīng)用[D];江蘇大學(xué);2015年

2 王萬宗;體外三維培養(yǎng)條件下轉(zhuǎn)化生長因子β1基因轉(zhuǎn)染的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促成軟骨細(xì)胞分化的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

本文編號：2725241