發(fā)布時間：2020-06-11 07:36

【摘要】：目的利用全基因組外顯子測序技術(shù)篩查家系A(chǔ)IS的致病基因,并在其它家系A(chǔ)IS及散發(fā)AIS人群中靶向測序驗證,比較AIS病例組與正常對照組致病基因表達(dá)水平的差異,初步探索其可能的致病機(jī)制。方法1)收集南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院脊柱外科在2016年6月至2018年1月收治住院或復(fù)查的AIS病人及因外傷收治入院而無其它已知骨科疾病的病人的外周血DNA,收集AIS家系成員及正常對照的外周血淋巴細(xì)胞;2)采用全基因組外顯子測序技術(shù)篩查家系I中的AIS致病基因,測序?qū)ο鬄棰?5(正常),Ⅲ:6(AIS患者)及Ⅲ:7(AIS患者),結(jié)合相關(guān)研究報道的致病基因篩選方法,篩選Ⅲ:6及Ⅲ:7中共有的突變,并從中剔除掉與Ⅲ:5相同的突變,對剩余的候選致病基因進(jìn)行家系共分離,對最終篩選出來的致病基因進(jìn)行軟件信息學(xué)的預(yù)測分析及物種保守性分析;采用靶向測序技術(shù)篩查家系II中的AIS患者及散發(fā)AIS患者的致病基因;3)采用EB病毒轉(zhuǎn)染人外周血B淋巴細(xì)胞,使之成為永生化的B淋巴細(xì)胞,提取總RNA,利用RT-PCR評價致病基因在AIS病例組與正常對照組之間表達(dá)水平的差異。結(jié)果在復(fù)合雜合遺傳模式下,Ⅲ:6及Ⅲ:7(除去Ⅲ:5)共有3個基因7個位點(diǎn)的突變,但這些變異位點(diǎn)均未能實現(xiàn)復(fù)合雜合遺傳模式下的家系I成員的疾病共分離,因此予以剔除;在純合遺傳模式下,Ⅲ:6及Ⅲ:7(除去Ⅲ:5)有12個共有的突變基因,通過家系共分離成功篩查到致病基因突變位點(diǎn):ADAMTS9 c.625CT(純合),且軟件信息學(xué)預(yù)測提示該位點(diǎn)突變有害,物種保守性分析提示該位點(diǎn)高度保守;靶向測序家系II中AIS成員中的ADAMTS9基因,成功篩查到復(fù)合雜合突變ADAMTS9 c.625CT(雜合)+ADAMTS9 c.4811GA(雜合),并實現(xiàn)了復(fù)合雜合模式下家系II成員的疾病共分離;在35例散發(fā)病人中發(fā)現(xiàn)一例AIS病人C5存在ADAMTS9的復(fù)合雜合突變ADAMTS9 c.625CT+ADAMTS9 c.4811GA,94例正常對照中沒有發(fā)現(xiàn)ADAMTS9 c.625CT(純合)及ADAMTS9 c.4811GA(雜合),但在1例正常對照中發(fā)現(xiàn)了ADAMTS9 c.625CT(雜合),經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,我們發(fā)現(xiàn)AIS組ADAMTS9的驗證率顯著高于正常對照組(p0.05),sanger測序未篩查到POC5、AKAP2及MAPK7的突變,RT-PCR結(jié)果顯示兩例家系中的AIS成員的ADAMTS9的表達(dá)水平均高于正常對照,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論1.ADAMTS9基因是AIS的可疑致病基因;2.ADAMTS9基因的過表達(dá)可能參與AIS的致病機(jī)制。
【圖文】：

脊柱側(cè)凸是一種三維脊柱畸形，這種三維畸形表現(xiàn)為一段或多段脊柱側(cè)向彎曲并伴有椎體旋轉(zhuǎn)。在影像學(xué)上，使用 Cobb's 方法測量脊柱的側(cè)向彎曲，如果Cobb’s 角度大于 10°即可定義為脊柱側(cè)凸（圖 1d），Cobb's 角度較小的脊柱側(cè)凸在外表上往往沒有明顯的陽性體征，嚴(yán)重的脊柱側(cè)凸可表現(xiàn)為外觀畸形（圖 1a），雙肩失衡及剃刀背畸形（圖 1b），甚至伴有心肺功能障礙的體征表現(xiàn)。根據(jù)病因可分為特發(fā)性脊柱側(cè)凸，先天性脊柱側(cè)凸，神經(jīng)肌肉型脊柱側(cè)凸，神經(jīng)纖維瘤病合并脊柱側(cè)凸，間充質(zhì)病變合并脊柱側(cè)凸，骨軟骨營養(yǎng)不良合并脊柱側(cè)凸及代謝性障礙合并脊柱側(cè)凸等[1]。其中特發(fā)性脊柱側(cè)凸是以上幾種側(cè)凸種類中最為常見的，特發(fā)性脊柱側(cè)凸的診斷除滿足側(cè)凸的基本要求外，還需滿足影像學(xué)上無脊柱結(jié)構(gòu)畸形（圖 1c），并排除掉其他可能的致病病因，根據(jù)發(fā)病年齡的不同，又可細(xì)分為幼兒型脊柱側(cè)凸，少兒型脊柱側(cè)凸及青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸，，其中青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸（adolescent idiopathic scoliosis，AIS）的發(fā)病率最高[2]。

2 實驗材料與方法2.1 研究對象2.1.1 全基因組外顯子測序研究對象2.1.1.1 研究家系一般情況在湖南省衡陽縣收集了一個 AIS 家系（家系 I），家系中的兩名 AIS 患者經(jīng)過脊柱外科醫(yī)生的確診，符合該病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。詳細(xì)資料如下：先證者家族 3 代共 20 人，我們共采集到 14 例，其中男 7 例，女 7 例，患者2 例（圖 2）。先證者 III:6，女，17 歲，14 歲發(fā)現(xiàn)脊柱側(cè)凸，于脊柱外科行矯形手術(shù)治療（圖 3）；患者 III:7，男，14 歲，14 歲診斷為 AIS，于脊柱外科行手術(shù)治療（圖 4）；余家系成員經(jīng)詳細(xì)的病史詢問及體格檢查，對于懷疑側(cè)彎者，行胸腰椎正側(cè)位 X 片檢查，均無脊柱側(cè)凸。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R726.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 ;2014年全國學(xué)生體質(zhì)健康調(diào)研結(jié)果[J];中國學(xué)校衛(wèi)生;2015年12期

2 柯榮軍;曹興兵;黃永輝;劉方剛;陳燕;呂飛;;鎮(zhèn)江市青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的患病率調(diào)查[J];江蘇醫(yī)藥;2015年18期

3 柯?lián)P;何家雄;潘志雄;;佛山市青少年脊柱側(cè)凸患病率調(diào)查[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

4 劉巍;陳慶賀;王侖;晁民;屈金良;蘆淼;柳思羽;;哈爾濱市青少年脊柱側(cè)凸普查與支具治療結(jié)果分析[J];中國矯形外科雜志;2011年15期

5 張亞欽;李輝;季成葉;;中國0至18歲正常兒童青少年身體比例生長規(guī)律的研究[J];中國循證兒科雜志;2010年05期

6 黃愛兵;邱勇;殷剛;孫光權(quán);李海波;錢邦平;朱澤章;;青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者軟骨細(xì)胞中Sox9的表達(dá)及意義[J];中國脊柱脊髓雜志;2008年12期

7 王振堂;李中實;劉朝暉;王衛(wèi)國;陳瀛;趙景鑫;石東平;楊連發(fā);;北京市中小學(xué)生脊柱側(cè)凸患病率調(diào)查報告[J];中國脊柱脊髓雜志;2007年06期

8 王斌;孫強(qiáng);邱勇;劉臻;邱旭升;馬兆龍;孫旭;夏才偉;;青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸青春期生長發(fā)育形態(tài)學(xué)特征[J];中華骨科雜志;2006年09期

本文編號：2707588