本文關鍵詞：右美托咪定通過抑制JNK通路減輕大鼠腦缺血再灌注損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景及目的缺血性腦血管病致死率、致殘率高,嚴重威脅人類健康,而且缺血區(qū)重新恢復血液灌注后,常發(fā)生缺血再灌注損傷。缺血再灌注損傷涉及一系列的復雜的病理生理學過程,包括氨基酸興奮性毒性、自由基損傷、Ca2+超載、炎癥反應、細胞凋亡、線粒體功能障礙等,而細胞凋亡在其中起著重要的作用。作為MAPK家族的三大成員之一,JNK能夠被一系列細胞外刺激激活,通過線粒體途徑和死亡受體途徑誘導caspase級聯(lián)反應激活caspase-3,促進細胞凋亡,加快缺血區(qū)腦細胞的死亡速度。右美托咪定是高選擇性α2腎上腺素能受體激動劑,其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、外周神經(jīng)系統(tǒng)和自主神經(jīng)節(jié)中廣泛分布,大量基礎研究表明右美托咪定有抗炎抗凋亡的特性,但機制并未完全清楚。本研究試圖建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型,通過給予右美托咪定(Dex)、α2腎上腺素受體拮抗劑育亨賓(Yoh)、JNK通路抑制劑SP600125,探討右美托咪定在腦缺血再灌注損傷中的作用是否與JNK有關,為臨床更好的恢復腦缺血后大腦功能提供更為確切的理論依據(jù)。材料與方法SD大鼠隨機分為八組(n=24),Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組、I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組。I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組采用改良線栓法建立大鼠大腦中動脈栓塞模型(MCAO),Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組僅分離血管,不進行血管結扎及線栓置入,其余手術操作同缺血組。Sham+Yoh+Dex組和I/R+Yoh+Dex組在分離血管或缺血前30 min腹腔注射0.5 mg/kg育亨賓,分離血管或缺血即刻尾靜脈泵注右美托咪定3 ug/kg,5 min內(nèi)泵完,后6 ug·kg-1·h-1持續(xù)泵注2 h。Sham+Dex組和I/R+Dex組在分離血管或缺血前30 min給予等量生理鹽水,分離血管或缺血即刻給予右美托咪定。Sham組和I/R組則均給予等量生理鹽水。Sham+SP600125組和I/R+SP600125組則是分離血管或造模前30 min側腦室注射10 ul SP600125(溶于1%DMSO中,濃度30 mg/ml)。建立大鼠暫時性局灶性腦缺血再灌注模型,缺血90 min后拔出線栓,再灌注24 h后進行神經(jīng)功能評分;隨后處死大鼠,采用干濕比法檢測腦組織含水量,TTC染色測定腦組織梗死面積,免疫熒光觀察腦組織p-JNK、活化的caspase-3表達變化,Western-blot分析JNK、p-JNK蛋白含量,闡明右美托咪定在大鼠腦缺血再灌注損傷中產(chǎn)生保護作用的可能機制。統(tǒng)計學分析收集數(shù)據(jù)并采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件進行處理。定量資料采用均數(shù)±標準差(X±S)表示,多組間定量資料比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較采用最小顯著差異(least significant difference,LSD)t檢驗,檢驗水準取α=0.05。結果1神經(jīng)功能評分的比較Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組大鼠從清醒至取腦組織前均無神經(jīng)功能缺損癥狀,無統(tǒng)計學差異(P0.05);與Sham組比較,I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組大鼠均有不同程度的左前肢肢體偏癱癥狀,神經(jīng)功能評分均明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R組相比,I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組神經(jīng)功能評分明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);I/R+Yoh+Dex組神經(jīng)評分較I/R+Dex組明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2腦組織含水量變化Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);與Sham組相比,I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組腦組織含水量均明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R組相比,I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組腦組織含水量明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);I/R+Yoh+Dex組與I/R+Dex組相比,腦組織含水量明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3腦梗死面積的比較Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組未發(fā)現(xiàn)梗死灶,無統(tǒng)計學差異(P0.05);與Sham組相比,I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組腦組織梗死面積明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R組相比,I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組腦組織梗死面積明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);I/R+Yoh+Dex組與I/R+Dex組相比,腦組織梗死面積增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4免疫熒光觀察JNK和caspase-3激活1.p-JNK的表達Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組可見少量p-JNK陽性細胞,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);與Sham組相比,I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組大鼠腦組織出現(xiàn)大量p-JNK陽性細胞,p-JNK表達顯著上調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R組相比,I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組p-JNK表達下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R+Dex組相比,I/R+Yoh+Dex組p-JNK表達增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫熒光雙標顯示,p-JNK與GFAP標記的星形膠質(zhì)細胞存在共表達現(xiàn)象。2.cleaved caspase-3的表達Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組可見少量cleaved caspase-3陽性細胞,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);與Sham組相比,I/R組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組大鼠腦組織出現(xiàn)大量cleaved caspase-3陽性細胞,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R組相比,I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組cleaved caspase-3的表達下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R+Dex組相比,I/R+Yoh+Dex組cleaved caspase-3陽性細胞增多,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5免疫印跡檢測腦組織JNK及p-JNK蛋白含量Sham組、Sham+Dex組、Sham+Yoh+Dex組、Sham+SP600125組p-JNK蛋白含量無統(tǒng)計學差異(P0.05);與Sham組相比,IR組、I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組p-JNK蛋白含量顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R組相比,I/R+Dex組、I/R+Yoh+Dex組、I/R+SP600125組p-JNK蛋白含量降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與I/R+Dex組相比,I/R+Yoh+Dex組p-JNK蛋白含量升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1.JNK信號通路參與了腦缺血再灌注損傷,阻斷JNK可減少凋亡執(zhí)行者caspase-3的激活,進而減輕缺血再灌注損傷。2.右美托咪定能減輕腦缺血再灌注損傷,可能的機制為激動α2腎上腺素能受體,抑制JNK的磷酸化,減少caspase-3的激活。
【關鍵詞】：右美托咪定 缺血再灌注損傷 JNK
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 縮略詞表14-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-28
• 結果28-35
• 討論35-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-46
• 綜述 右美托咪定神經(jīng)保護作用的機制及應用46-61
• 參考文獻56-61
• 個人簡歷及在校期間發(fā)表論文61-62
• 致謝62

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本文編號：269695