【摘要】：目的:研究迷走神經(jīng)活性變化對膿毒癥大鼠血清炎癥因子及腸道屏障功能的影響,并探討其可能機(jī)制。方法:60只雄性SD大鼠(224.6±8.5g)隨機(jī)分為6組(n=10),空白對照組(Control)、膿毒癥組(Sepsis)、右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)處理組(S+D)、甲基牛扁亭堿(Methyllycaconitine,MLA)處理組(S+M)、迷走神經(jīng)電刺激組(S+E)、迷走神經(jīng)離斷組(S+B)。采用盲腸穿刺結(jié)扎(Cecal ligation and puncture,CLP)法構(gòu)建大鼠膿毒癥模型,Control組大鼠只游離盲腸,不做結(jié)扎穿孔。S+D組大鼠造模成功后沿尾靜脈以5ug·kg~(-1)·h~(-1)持續(xù)泵入DEX,持續(xù)時間為6h;S+M組大鼠于造模成功后腹腔注射MLA 5mg/kg;S+E組大鼠于造模成功后手術(shù)暴露左側(cè)頸迷走神經(jīng),使用RM-6240多通道生理記錄系統(tǒng)給予迷走神經(jīng)電刺激(電壓:5V,波寬:2ms,頻率:1Hz),刺激時間持續(xù)30min;S+B組大鼠造模成功后手術(shù)暴露左側(cè)頸迷走神經(jīng),行迷走神經(jīng)離斷術(shù)。Control組、Sepsis組、MLA組、S+E組、S+B組均沿尾靜脈泵入0.9%生理鹽水5ml·kg~(-1)·h~(-1)。各組均于造模后6h時處死大鼠,留取大鼠血清和小腸組織,運用光學(xué)顯微鏡觀察小腸組織的病理學(xué)變化;運用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各組大鼠血清中D-乳酸(D-lactate)、TNF-α、IL-6的水平;運用蛋白印跡法(Western-Blot,WB)方法檢測小腸組織緊密連接蛋白(Occludin)和α7煙堿型乙酰膽堿受體(α7nAChR)的相對表達(dá)水平;運用免疫組化檢測腸道Occludin和α7nAChR的表達(dá)。結(jié)果:(1)與Control組比較,Sepsis組大鼠血清D-Lac、TNF-α、IL-6水平顯著升高(P0.05),腸道組織Occludin表達(dá)下調(diào)(P0.05);與Sepsis組相比,S+D組與S+E組大鼠血清D-Lac、TNF-α、IL-6水平降低(P0.05),腸道組織Occludin表達(dá)上調(diào)(P0.05);與Sepsis組比較,S+M組與S+B組大鼠血清清D-Lac、TNF-α、IL-6水平升高更為明顯(P0.05),腸道組織Occludin表達(dá)下調(diào)(P0.05)。(2)病理學(xué)方面,與Control組比較,Sepsis組、S+D組、S+M組、S+E組、S+B組小腸組織損傷明顯,其中S+D組與S+E組小腸組織損傷輕于Sepsis組;S+M組與S+B組小腸組織損傷重于Sepsis組。(3)與Control組比較,Sepsis組小腸組織α7nAChR表達(dá)下降(P0.05);與Control組比較,S+D組與S+E組小腸組織中α7nAChR表達(dá)上調(diào)(P0.05);與Sepsis組比較,S+D組與S+E小腸組織中α7nAChR表達(dá)上調(diào)(P0.05);與Sepsis組比較,S+M組與S+B小腸組織中α7nAChR表達(dá)下調(diào)(P0.05);S+D組與S+E組小腸組織中α7nAChR表達(dá)無明顯差異(P0.05);S+M組與S+B組小腸組織中α7nAChR表達(dá)無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:迷走神經(jīng)活性提高對膿毒癥大鼠腸道屏障功能有保護(hù)作用。右美托咪定可以保護(hù)膿毒癥大鼠腸道屏障功能,其機(jī)制可能與提高迷走神經(jīng)活性,激活α7nAChR有關(guān)。
【圖文】：

鼠模型的建立盲腸穿刺結(jié)扎（Cecal ligation and puncture，CLP）27]。60 只雄性 SD 大鼠隨機(jī)分成 6 組（n=10）。大鼠。麻醉選用 20%烏拉坦，劑量為 0.6ml/100g，腹腔沿大鼠尾靜脈置入 24G 留置針。腹部備皮，碘伏消 的切口，小心游離腸系膜及回盲部，用 4-0 絲線結(jié)頭在盲腸結(jié)扎遠(yuǎn)端對穿 3 次，輕輕擠出少許腸內(nèi)容范圍和穿孔規(guī)模數(shù)量盡量保持相同，以保證大鼠膿小心還納腸段，應(yīng)注意避免腸梗阻的發(fā)生，逐層以 膚，常規(guī)消毒，鹽水紗布覆蓋。Control 組以同樣方部，但不做結(jié)扎穿孔，逐層縫合腹膜和皮膚。各組9%生理鹽水 1ml 以補(bǔ)充手術(shù)中的體液丟失。

般情況比較大鼠術(shù)后生命體征平穩(wěn)，眼角、口鼻無膿性分泌量清亮腹水，腸管形態(tài)正常，無黏連、充血。分大鼠術(shù)后呼吸急促，個別大鼠口鼻、眼角可見味，有較多渾濁或血性腹水，回盲部充血變黑 組：少數(shù)大鼠術(shù)后呼吸急促，個別大鼠口鼻、腹后腹腔有輕微惡臭，，可見渾濁或血性腹水，較 Sepsis 組輕。B 組：幾乎所有大鼠術(shù)后發(fā)生呼吸急促，呼吸幅出現(xiàn)膿性分泌物。開腹后腹腔有惡臭味，大量充血嚴(yán)重，其程度較 Sepsis 組更為嚴(yán)重。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2690601