發(fā)布時間：2020-05-25 04:19

【摘要】：研究目的鞘內(nèi)小劑量應用嗎啡,可以達到和口服或其它外周途徑給藥相同的鎮(zhèn)痛效果,且由于應用劑量較小,作用位點局限,副作用較少。嗎啡鎮(zhèn)痛作用于mu阿片受體(mu opioid receptor,MOR),mu受體的表達已經(jīng)證實與腫瘤進展成正相關。隨著癌癥病人帶病生存期的延長,癌痛控制療法逐漸轉(zhuǎn)變成為長期鎮(zhèn)痛療法。為探索應用嗎啡進行長期癌痛控制更為優(yōu)化的給藥方式,本實驗建立骨癌痛SD大鼠鞘內(nèi)留置管,長期、多次給藥模型。比較外周給藥組及鞘內(nèi)留置管給藥組,鎮(zhèn)痛效果及腫瘤組織及鞘內(nèi)組織MOR表達水平差異。研究方法1、為建立可用、穩(wěn)定的大鼠骨癌痛模型。準備健康雌性SD大鼠5只,分別在其股骨腔內(nèi)種植不同濃度的Walker256腫瘤細胞,模型建立后測量并記錄大鼠機械痛閾變化,每7天X線下觀察大鼠股骨改變,21天后取材HE染色后病理分析。探索在SD大鼠中,應用Walker256腫瘤細胞建立股骨骨癌痛模型的合適細胞濃度。2、雌性SD大鼠(150-180g)24只,全部大鼠于股骨注射Walker256大鼠腹水癌細胞制作疼痛模型。癌痛造模成功后,完全隨機法分為空白組、腹腔組和鞘內(nèi)組,鞘內(nèi)組經(jīng)L6-S1棘突間隙放置鞘內(nèi)導管�？瞻捉M注射生理鹽水,腹腔(1ml,1次/d)、鞘內(nèi)(20ul,1次/d);腹腔組腹腔注射嗎啡(1.25mg/1ml,1次/d),鞘內(nèi)注射生理鹽水(20ul,1次/d);鞘內(nèi)組腹腔注射生理鹽水(1ml,1次/d),鞘內(nèi)注射等效腹腔組鎮(zhèn)痛效應的嗎啡(0.025mg/20ul,1次/d),連續(xù)鎮(zhèn)痛16天。記錄造模后大鼠機械痛閾變化;連續(xù)鎮(zhèn)痛結束后,western blot及免疫組化染色檢測脊髓組織和腫瘤組織MOR表達水平。研究結果1、將成功傳代培養(yǎng)的Walker256大鼠腫瘤細胞種植到大鼠股骨,制造大鼠股骨癌痛模型,細胞濃度為1×10~5個細胞/只的大鼠,癌痛出現(xiàn)時間最早、最為穩(wěn)定,病理改變最為明顯,在后續(xù)實驗種將采用此種細胞濃度建立骨癌痛模型。2、股骨骨癌痛SD大鼠鞘內(nèi)置管長期給藥模型中,鎮(zhèn)痛16天后腹腔組和鞘內(nèi)組比較,痛閾相近。腹腔組和鞘內(nèi)組分別與空白組比較,痛閾均顯著增加。在骨腫瘤組織MOR表達方面鞘內(nèi)組和空白組分別明顯低于腹腔組,P0.05。鞘內(nèi)組和空白組相比無統(tǒng)計學差異,P0.05。在脊髓組織,空白組、鞘內(nèi)組和腹腔組三組中MOR表達無統(tǒng)計學差異,P0.05。免疫組化觀察三組股骨腫瘤組織切片中,可見空白組與鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛組,MOR表達水平相近,P0.05。外周鎮(zhèn)痛組MOR表達遠高于空白組及鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛組,P0.05。在脊髓組織切片中,三組MOR表達都較少,未見明顯區(qū)別,P0.05。研究結論1、骨癌痛模型制作過程中發(fā)現(xiàn),種植腫瘤細胞濃度越高,所造成的動物行為學改變越早,模型越穩(wěn)定,可能腫瘤生成越早,當注射細胞濃度為1×10~5個細胞/只,可以最為快速地建立穩(wěn)定的大鼠骨癌痛模型。2、在大鼠骨癌痛模型中,鞘內(nèi)長期給予嗎啡鎮(zhèn)痛可以擁有和腹腔嗎啡鎮(zhèn)痛相近的鎮(zhèn)痛效果,且腫瘤組織MOR表達量減少,鞘內(nèi)組與空白組相比MOR表達未見顯著性差異。這可能由于腫瘤組織嗎啡受體的表達與作用在局部的嗎啡濃度有關,控制外周嗎啡的濃度,可能使腫瘤組織MOR表達不發(fā)生明顯增加。鞘內(nèi)鎮(zhèn)痛組與腫瘤模型空白組相比,腫瘤組織MOR表達和脊髓MOR表達都不存在明顯差異,說明鞘內(nèi)用藥并沒有影響鞘內(nèi)MOR的表達水平,對受體表達影響較小。鞘內(nèi)嗎啡鎮(zhèn)痛可以通過較小的用藥量,不影響機體本身MOR表達水平,達到和外周腹腔用藥相同的鎮(zhèn)痛效果,并可能對腫瘤進展的影響較小。
【圖文】：

Walker256 腹水癌細胞復蘇后及傳代培養(yǎng)至分裂旺盛期后 圖中標尺＝100umalker256 腫瘤細胞復蘇初期，細胞密度較低，增殖比較慢，貼壁不死細胞及細胞碎片、雜質(zhì)比較多。經(jīng)約一周的培養(yǎng)、傳代后，細胞輪廓清晰，繁殖迅速，處于對數(shù)生長期。

圖 1.3.2 種植不同濃度腫瘤細胞大鼠種植后第 13-第 21 天機械痛閾變化，60g 為截斷痛閾，，20g 診斷為痛覺過敏。從造模后第 13 天起紀錄注射不同數(shù)量細胞的五只大鼠的痛閾，得上圖，顏色越淺痛閾越低，可見隨著細胞數(shù)量得增多，大鼠痛覺敏感越為明顯，且出現(xiàn)時間越早。當細胞數(shù)量為 1×105每只時，大鼠從第 13 天起出現(xiàn)明顯的痛閾降低，痛覺過敏，從動物行為學上可以認為該大鼠股骨骨癌痛模型建立成功，疼痛明顯。
【學位授予單位】：北京市結核病胸部腫瘤研究所
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R614;R738

【參考文獻】

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1 羅放;嗎啡的免疫抑制研究[J];國外醫(yī)學.麻醉學與復蘇分冊;2003年04期

本文編號：2679560