【摘要】：目的本研究通過觀察高壓氧治療后大鼠背部延遲皮瓣與基底部瘢痕組織的厚度、I/III型膠原比值,延遲皮瓣血管數(shù)量和血管管徑、延遲皮瓣VEGF表達(dá)、延遲皮瓣血流量的變化,明確高壓氧治療對(duì)延遲皮瓣與基底部瘢痕粘連、延遲皮瓣血運(yùn)重建時(shí)間的影響,尋求一種更安全且需時(shí)更短的延遲皮瓣形成方法,為臨床延遲皮瓣法耳再造術(shù)進(jìn)一步縮短手術(shù)間隔時(shí)間提供一種可能的方法。方法1、延遲皮瓣模型本實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠背部模擬人耳再造的倒“C”形延遲皮瓣模型,蒂部為髂后上棘連線,以后正中線為中線向左右延伸,寬為3cm,皮瓣遠(yuǎn)端位于頭側(cè),長6cm。手術(shù)沿切口線切開皮膚全層,用組織剪于肉膜層與肌膜層間分離掀起皮瓣,僅蒂部為延遲皮瓣提供血運(yùn)。仔細(xì)止血后原位縫合,術(shù)后7日拆線。2、分組及處理健康雄性SD大鼠50只,隨機(jī)分為2組:高壓氧治療組和對(duì)照組。每組分別再分成術(shù)前、術(shù)后1,7,14,21天5組,每個(gè)亞組含有5只動(dòng)物。高壓氧治療組術(shù)后當(dāng)天開始每天給予高壓氧治療2次,具體方法:動(dòng)物置于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)艙內(nèi),10 min升壓至0.2MPa,穩(wěn)壓36 min,氧濃度為(86±2)%,穩(wěn)壓期間每10 min通風(fēng)換氣2min,15 min減壓出艙,2次之間間隔4 h以上,連續(xù)5天。對(duì)照組,術(shù)后不給予其他干預(yù)方式。3、標(biāo)本的采集處理及觀察指標(biāo)3.1皮瓣血流量應(yīng)用激光多普勒血流儀測(cè)量皮瓣血流量,每日觀察術(shù)后21天組皮瓣血流量,記錄術(shù)后兩組皮瓣最大血流量出現(xiàn)的時(shí)間,并記錄術(shù)前、術(shù)后第1、7、14、21天皮瓣的血流量。3.2皮瓣基底部炎癥反應(yīng)、瘢痕組織厚度及Ⅰ/Ⅲ型膠原比值取材方式:各組均于術(shù)前、術(shù)后第1、7、14、21天,使用腹腔注射5%戊巴比妥鈉(10 mmg/kg體重)麻醉大鼠,在大鼠背部皮瓣距遠(yuǎn)端1.0-2.0 cm處切取0.5 cm×0.5 cm的皮瓣及基底組織樣本浸泡于體積分?jǐn)?shù)4%甲醛液中,固定后石蠟包埋,制成切片,蘇木精-伊紅染色后顯微鏡下觀察。觀察皮瓣基底部炎癥反應(yīng)及形態(tài)變化。測(cè)量術(shù)后21天的皮瓣基底部肉膜與肌膜間致密的瘢痕粘連組織厚度。在40倍光鏡下隨機(jī)測(cè)量5處瘢痕粘連組織厚度,取平均值作為該組的瘢痕粘連組織厚度。將包埋的切片行苦味酸天狼星紅染色,切片在偏振光鏡下亮色為I型膠原,綠色為III型膠原。每張組織切片在偏振光200倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野,切片拍攝照片后,用Image-Pro Plus 6.0專業(yè)圖像分析軟件內(nèi),使用灰度標(biāo)記技術(shù),比較兩組間I/III型膠原比值。3.4皮瓣血管數(shù)、血管管徑取材方式:各組均于術(shù)前、術(shù)后第1、7、14、21天,使用腹腔注射5%戊巴比妥鈉(10 mg/kg體重)麻醉大鼠,在大鼠背部皮瓣距遠(yuǎn)端1.0-2.0 cm處切取0.5 cm×0.5 cm的皮瓣及基底組織樣本浸泡于體積分?jǐn)?shù)4%甲醛液中,固定后石蠟包埋,制成切片,蘇木精-伊紅染色后顯微鏡下觀察。每組切片在40倍光鏡下計(jì)算血管數(shù),取該組平均值作為該組的血管數(shù);40倍光鏡下,隨機(jī)選取3個(gè)血管,測(cè)量出每個(gè)血管口徑的長軸和短軸的平均值,取3個(gè)數(shù)值的平均值作為該切片的平均血管口徑管徑,取平均值作為該組的管徑。3.5皮瓣VEGF表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)兩組大鼠于術(shù)前、術(shù)后第1、7、14、21天,使用腹腔注射5%戊巴比妥鈉(10 mg/kg體重)麻醉大鼠,分別在距皮瓣遠(yuǎn)端1.0-2.0 cm處取約0.5 cm×0.5 cm大小的全層皮膚及皮下組織。用體積分?jǐn)?shù)4%甲醛固定,以兔抗大鼠血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,染色方法按照試劑盒說明書操作。最后以DAB顯色,有棕黃色顆粒者的細(xì)胞為陽性染色。每組切片在400倍鏡下隨機(jī)選取3個(gè)視野,計(jì)錄陽性數(shù)目,取平均值為該切片陽性細(xì)胞數(shù)。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,結(jié)果用X±s表示。采用成組t檢驗(yàn)比較兩組間差異,檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。結(jié)果1.皮瓣血流量兩組皮瓣血流量均在術(shù)后1天明顯降低,之后血流量開始上升。高壓氧治療組在術(shù)后1、7、14、21天皮瓣血流量均高于對(duì)照組,兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。高壓氧治療組最大血流量出現(xiàn)在術(shù)后10±1.20天,對(duì)照組最大血流量出現(xiàn)在13± 1.40天,兩組最大皮瓣血流量出現(xiàn)時(shí)間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.皮瓣基底部炎癥反應(yīng)、瘢痕組織厚度及I/III型膠原比值高壓氧治療組皮瓣術(shù)后皮下組織水腫較對(duì)照組輕,組織炎性細(xì)胞浸潤較少。術(shù)后21天可見高壓氧治療組基底部成纖維細(xì)胞較少,排列較整齊,基底部組織密度較小、組織間粘連較輕。對(duì)照組基底部成纖維細(xì)胞較多,膠原致密,排列紊亂,旋渦狀或結(jié)節(jié)狀排列分布。術(shù)后21天基底部組織瘢痕粘連厚度高壓氧治療組小于對(duì)照組,兩者的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。高壓氧治療組I/III型膠原比值較對(duì)照組降低(P0.05)。4.皮瓣血管數(shù)及血管管徑術(shù)后1天皮瓣血管數(shù)兩組差異不大(P0.05)。術(shù)后第7天、14天、21天,高壓氧治療組血管數(shù)高于普通組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩組皮瓣血管管徑均在術(shù)后1天最小,在術(shù)后14天時(shí)管徑值最大。高壓氧治療組在術(shù)后1天開始血管管徑大于對(duì)照組,兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.皮瓣VEGF表達(dá)兩組皮瓣VEGF數(shù)均在術(shù)后1天即開始升高,在術(shù)后14天時(shí)到達(dá)最大值。高壓氧治療組在術(shù)后各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)VEGF數(shù)值均高于對(duì)照組,兩組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.高壓氧能減輕大鼠延遲皮瓣與基底部的瘢痕粘連;2.高壓氧能提高大鼠延遲皮瓣的血流量,其機(jī)制可能與促進(jìn)血管生成有關(guān)。
【圖文】：

皮瓣蒂部寬度

皮瓣長軸長度
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R622

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本文編號(hào)：2678575