【摘要】：目的:(1)通過激光共聚焦顯微鏡(Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM)及掃描電鏡下(Scanning Electron Microscopy,SEM)觀察1個(gè)月內(nèi)4個(gè)不同時(shí)間點(diǎn),鈦合金表面金黃色葡萄球菌(Staphylococus aureus,S.aureus)細(xì)菌生物膜(Bacterial Biofilm,BBF)形態(tài)結(jié)構(gòu)并進(jìn)行觀察分析。(2)評估0.5%聚維酮碘(Povidone Iodine,PVP-I)對1個(gè)月內(nèi)4個(gè)不同時(shí)間段鈦合金表面金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜的抗菌活性。(3)為臨床內(nèi)置物相關(guān)感染的認(rèn)識(shí)及治療方案提供參考。方法:(1)在臨床鈦合金材料表面建立1周、2周、3周、4周4個(gè)不同時(shí)間段的金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜,使用CLSM及SEM對4個(gè)不同時(shí)間段的BBF的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察分析。(2)在臨床鈦合金材料表面建立1周、2周、3周、4周4個(gè)不同時(shí)間段的金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜,每個(gè)時(shí)間段分3組,一組PBS處理,另兩組分別用0.5%PVP-I進(jìn)行浸泡作用5min和10min,并用活菌計(jì)數(shù)法了解培養(yǎng)不同時(shí)間的金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜內(nèi)細(xì)菌的抗菌活性。結(jié)果:(1)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長金黃色葡萄球菌細(xì)菌生物膜胞外多聚物不斷集聚,層數(shù)增多,細(xì)菌生物膜空間結(jié)構(gòu)變成熟,到第3周時(shí)變化明顯,到第4周時(shí)細(xì)菌生物膜達(dá)到成熟穩(wěn)定。(2)0.5%PVP-I對BBF中的細(xì)菌有很好的殺菌作用,5min組較PBS組和10min組較PBS組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但隨著細(xì)菌生物膜培養(yǎng)時(shí)間的延長,PVP-I作用減弱,但PVP-I浸泡時(shí)間延長后殺菌效果更顯著,10min組較5min組效果好(P0.05),然而PVP-I無法完全殺滅BBF中的細(xì)菌。結(jié)論:(1)細(xì)菌生物膜的成熟是細(xì)菌細(xì)胞膜內(nèi)部和外部的成熟,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長多聚物增加,形成一定空間結(jié)構(gòu),最后細(xì)菌及其分泌的胞外多聚物共同組成成熟穩(wěn)定的微環(huán)境,也就是成熟的細(xì)菌生物膜。(2)年輕的細(xì)菌生物膜及成熟的細(xì)菌生物膜以3周為界,主要區(qū)別在于胞外多聚物分泌的成熟,細(xì)菌及胞外多聚物整體微環(huán)境的成熟穩(wěn)定。(3)對于早期細(xì)菌生物膜,0.5%PVP-I作用10min較作用5min效果好,而成熟的生物膜延長作用無意義。(4)建議早期臨床內(nèi)置物相關(guān)的感染,時(shí)間在3周之內(nèi)的0.5%PVP-I浸泡10min效果更佳。(5)采用不同染色劑組合觀察細(xì)菌生物膜演變是一種可靠有效的方法。
【圖文】：

11圖 1 ATCC25923 培養(yǎng) 4 個(gè)不同時(shí)間段(SYTO9, PI)雙染色后 CLSM 觀察結(jié)果（200x），SYTO9 將活菌染成綠色，PI 把死菌染成紅色。

12圖 2 ATCC25923 培養(yǎng) 4 個(gè)不同時(shí)間段(FITC-ConA, PI)雙染色 CLSM 觀察結(jié)果（200x），，F(xiàn)ITC-ConA 將生物膜染成綠色，PI 把死菌染成紅色。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R687;R318.08

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2675626