發(fā)布時(shí)間：2020-05-17 05:40

【摘要】：乳腺癌是女性最常見的腫瘤之一,同時(shí)也是女性癌癥死亡的主要原因。其中腫瘤轉(zhuǎn)移是患者致死的主要原因。因此,探索乳腺癌的發(fā)展,找到對(duì)乳腺癌的診斷及治療相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志物十分重要。溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC3A2(也稱為4F2hc/CD98hc),是大小約為85KDa的Ⅱ型跨膜糖蛋白,它可以通過激活整合素信號(hào)通路,影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和凋亡等,在腫瘤的發(fā)展過程中具有十分重要的作用。目的:1.觀察SLC3A2在乳腺癌組織中的表達(dá)情況,探討其表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系;2.觀察SLC3A2的表達(dá)對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,探索其對(duì)生物學(xué)行為影響可能存在的機(jī)制。方法:1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)檢測(cè)117例乳腺癌組織和68例乳腺良性疾病組織中SLC3A2的表達(dá)水平;2.應(yīng)用QRT-PCR方法檢測(cè)1株正常乳腺上皮細(xì)胞系和4株乳腺癌細(xì)胞系中SLC3A2 mRNA的表達(dá)情況;3.通過克隆技術(shù)構(gòu)建SLC3A2的shRNA表達(dá)質(zhì)粒建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系,以脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,篩選并獲得穩(wěn)定SLC3A2低表達(dá)的細(xì)胞株,應(yīng)用QRT-PCR和Western blot方法對(duì)細(xì)胞株進(jìn)行驗(yàn)證;4.使用噻唑藍(lán)比色法(MTT)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)SLC3A2表達(dá)對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力的影響;5.應(yīng)用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)SLC3A2表達(dá)對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力的影響;6.應(yīng)用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)下調(diào)SLC3A2表達(dá)對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞侵襲能力的影響;7.應(yīng)用Western blot方法探索SLC3A2對(duì)乳腺癌生物學(xué)行為影響的機(jī)制。結(jié)果:1.SLC3A2定位于胞膜上,其在乳腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于在乳腺良性疾病組織中(P0.05);2.乳腺癌中SLC3A2的陽性表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、Ki-67密切相關(guān)(P0.05),與患者年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)、ER、PR、HER-2、EGFR表達(dá)情況無關(guān)(P0.05);3.QRT-PCR結(jié)果顯示:4株乳腺癌細(xì)胞系中SLC3A2 mRNA表達(dá)水平均高于乳腺正常上皮細(xì)胞系(P0.05);4.針對(duì)SLC3A2 mRNA不同序列區(qū)域,我們構(gòu)建了4組shRNA(SLC3A2-shRNA1、SLC3A2-shRNA2、SLC3A2-shRNA3、SLC3A2-shRNA4)。分別轉(zhuǎn)染4組shRNA及相應(yīng)的空白載體。Western blot檢測(cè)顯示,與空白組和對(duì)照組相比,SLC3A2-shRNA1組、SLC3A2-shRNA2組SLC3A2的表達(dá)受到不同程度的抑制,成功獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SLC3A2-shRNA1的MDA-MB-231細(xì)胞株進(jìn)行下續(xù)實(shí)驗(yàn);5.MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明下調(diào)SLC3A2表達(dá)后可以抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖(P0.05);6.細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示下調(diào)SLC3A2表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力受到抑制(P0.05);7.Western blot結(jié)果顯示下調(diào)SLC3A2表達(dá)后MMP-2蛋白的表達(dá)下降。結(jié)論:SLC3A2在乳腺癌的發(fā)展過程中起促進(jìn)作用,這一作用可能是通過MMP-2蛋白介導(dǎo)的,SLC3A2可能作為乳腺癌靶點(diǎn)治療的指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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