發(fā)布時(shí)間：2020-04-28 17:11

【摘要】：目的:蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是一種主要的絲氨酸-蘇氨酸磷酸酶,負(fù)責(zé)調(diào)控生物體內(nèi)大量磷酸化活動(dòng),并且對(duì)腫瘤生成、胚胎發(fā)育、慢性呼吸道疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等產(chǎn)生重要影響。但是PP2A與破骨細(xì)胞活化之間的關(guān)系還不清楚。所以本實(shí)驗(yàn)旨在研究PP2A對(duì)破骨細(xì)胞生成分化的影響及提出一個(gè)新的干預(yù)靶點(diǎn)來治療假體周圍骨溶解或其他破骨細(xì)胞所介導(dǎo)的骨吸收相關(guān)疾病。方法:我們研究了初次關(guān)節(jié)置換的滑膜與因假體周圍骨溶解而行關(guān)節(jié)翻修的滑膜PP2A的表達(dá)變化。將鈦顆粒植入6周大的雄性C57BL/6小鼠顱骨表面,并且每天頭皮下注射4μg/kg或者0.4μg/kg的岡田酸(Okadaic Acid,OA)。2周后處死老鼠,取下顱骨標(biāo)本行微計(jì)算機(jī)斷層掃描(micro-CT)掃描和組織學(xué)染色分析。利用RAW264.7細(xì)胞,研究小干擾核糖核酸(PP2A si RNA)敲低PP2A對(duì)破骨細(xì)胞活化及骨吸收功能的影響。行蛋白電泳實(shí)驗(yàn)明確PP2A調(diào)控破骨細(xì)胞生成分化的具體機(jī)制。結(jié)果:PP2A在人體關(guān)節(jié)翻修滑膜和小鼠骨溶解模型中高表達(dá),抑制PP2A有效地減輕了鈦顆粒誘導(dǎo)的骨質(zhì)破壞,減少了破骨細(xì)胞的數(shù)量。利用PP2A si RNA可以抑制破骨細(xì)胞生成分化和骨吸收功能,并且進(jìn)一步證實(shí)了是通過抑制核因子κB(NF-κB)受體活化配體(RANKL)誘導(dǎo)的NF-κB和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信號(hào)通路發(fā)揮作用。我們還發(fā)現(xiàn)應(yīng)用PP2A si RNA可降低下游的活化T細(xì)胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATc1)和即刻早期基因c-Fos的表達(dá)。結(jié)論:我們的研究結(jié)果闡明了PP2A在破骨細(xì)胞活化中重要性,同時(shí)證明了PP2A可以作為一種新的干預(yù)靶點(diǎn)來治療因無菌性顆粒或其他原因誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞所介導(dǎo)的骨吸收相關(guān)疾病。
【圖文】：

關(guān)節(jié)翻修術(shù)中滑膜均可以表達(dá)PP2A。并且在本研究中，我們觀察到PP2A在人體髖關(guān)節(jié)滑膜中主要表達(dá)在多核巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞。同時(shí)，，關(guān)節(jié)翻修術(shù)中取的滑膜標(biāo)本較初次置換中取的滑膜具有更高的PP2A表達(dá)量（圖1A，B）。在人體髖關(guān)節(jié)滑膜組織，許多文獻(xiàn)已經(jīng)證實(shí)在體內(nèi)RANKL主要表達(dá)于成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、基質(zhì)成纖維細(xì)胞和活化的T細(xì)胞[30-33]。而我們通過RANKL的免疫組化發(fā)現(xiàn)，RANKL在關(guān)節(jié)翻修滑膜和初次關(guān)節(jié)置換滑膜中均有較高的表達(dá)，并且表達(dá)趨勢(shì)與觀察到的PP2A表達(dá)趨勢(shì)是一致的（圖1C）。此外，通過滑膜的HE染色可以看出，關(guān)節(jié)翻修的滑膜相較于初次關(guān)節(jié)置換的滑膜存在較多的炎癥細(xì)胞浸潤。TRAP染色顯示出初次關(guān)節(jié)置換和關(guān)節(jié)翻修滑膜中破骨細(xì)胞的存在。暗紫色染色的多核細(xì)胞被認(rèn)為是TRAP染色的陽性區(qū)域。與之前觀察到的PP2A的表達(dá)趨勢(shì)一致，假體周圍骨溶解引起的關(guān)節(jié)翻修滑膜比初次關(guān)節(jié)置換滑膜存在更多的破骨細(xì)胞（圖1D）。

質(zhì)破壞的程度逐步增加，顯示Ti顆粒誘導(dǎo)骨質(zhì)破壞的時(shí)間依賴性。免疫組化的結(jié)果顯示出PP2A在Ti顆粒誘導(dǎo)的小鼠骨溶解模型中的表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組，且這種高表達(dá)趨勢(shì)呈現(xiàn)出時(shí)間依賴性（圖2B和F）。與PP2A一致，RANKL在Ti顆粒誘導(dǎo)的小鼠骨溶解模型中同樣高表達(dá)（圖2C和G），這也與人體滑膜染色的結(jié)果相符合。此外，我們觀察到在Ti顆粒誘導(dǎo)的小鼠骨溶解模型中存在更多數(shù)量的破骨細(xì)胞（圖2D和H）。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R687

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