【摘要】：目的:蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是一種主要的絲氨酸-蘇氨酸磷酸酶,負責調(diào)控生物體內(nèi)大量磷酸化活動,并且對腫瘤生成、胚胎發(fā)育、慢性呼吸道疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病等產(chǎn)生重要影響。但是PP2A與破骨細胞活化之間的關(guān)系還不清楚。所以本實驗旨在研究PP2A對破骨細胞生成分化的影響及提出一個新的干預靶點來治療假體周圍骨溶解或其他破骨細胞所介導的骨吸收相關(guān)疾病。方法:我們研究了初次關(guān)節(jié)置換的滑膜與因假體周圍骨溶解而行關(guān)節(jié)翻修的滑膜PP2A的表達變化。將鈦顆粒植入6周大的雄性C57BL/6小鼠顱骨表面,并且每天頭皮下注射4μg/kg或者0.4μg/kg的岡田酸(Okadaic Acid,OA)。2周后處死老鼠,取下顱骨標本行微計算機斷層掃描(micro-CT)掃描和組織學染色分析。利用RAW264.7細胞,研究小干擾核糖核酸(PP2A si RNA)敲低PP2A對破骨細胞活化及骨吸收功能的影響。行蛋白電泳實驗明確PP2A調(diào)控破骨細胞生成分化的具體機制。結(jié)果:PP2A在人體關(guān)節(jié)翻修滑膜和小鼠骨溶解模型中高表達,抑制PP2A有效地減輕了鈦顆粒誘導的骨質(zhì)破壞,減少了破骨細胞的數(shù)量。利用PP2A si RNA可以抑制破骨細胞生成分化和骨吸收功能,并且進一步證實了是通過抑制核因子κB(NF-κB)受體活化配體(RANKL)誘導的NF-κB和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信號通路發(fā)揮作用。我們還發(fā)現(xiàn)應用PP2A si RNA可降低下游的活化T細胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATc1)和即刻早期基因c-Fos的表達。結(jié)論:我們的研究結(jié)果闡明了PP2A在破骨細胞活化中重要性,同時證明了PP2A可以作為一種新的干預靶點來治療因無菌性顆�；蚱渌蛘T導的破骨細胞所介導的骨吸收相關(guān)疾病。
【圖文】：

關(guān)節(jié)翻修術(shù)中滑膜均可以表達PP2A。并且在本研究中，我們觀察到PP2A在人體髖關(guān)節(jié)滑膜中主要表達在多核巨噬細胞樣細胞和成纖維細胞樣細胞。同時，，關(guān)節(jié)翻修術(shù)中取的滑膜標本較初次置換中取的滑膜具有更高的PP2A表達量（圖1A，B）。在人體髖關(guān)節(jié)滑膜組織，許多文獻已經(jīng)證實在體內(nèi)RANKL主要表達于成骨細胞、骨細胞、基質(zhì)成纖維細胞和活化的T細胞[30-33]。而我們通過RANKL的免疫組化發(fā)現(xiàn)，RANKL在關(guān)節(jié)翻修滑膜和初次關(guān)節(jié)置換滑膜中均有較高的表達，并且表達趨勢與觀察到的PP2A表達趨勢是一致的（圖1C）。此外，通過滑膜的HE染色可以看出，關(guān)節(jié)翻修的滑膜相較于初次關(guān)節(jié)置換的滑膜存在較多的炎癥細胞浸潤。TRAP染色顯示出初次關(guān)節(jié)置換和關(guān)節(jié)翻修滑膜中破骨細胞的存在。暗紫色染色的多核細胞被認為是TRAP染色的陽性區(qū)域。與之前觀察到的PP2A的表達趨勢一致，假體周圍骨溶解引起的關(guān)節(jié)翻修滑膜比初次關(guān)節(jié)置換滑膜存在更多的破骨細胞（圖1D）。

質(zhì)破壞的程度逐步增加，顯示Ti顆粒誘導骨質(zhì)破壞的時間依賴性。免疫組化的結(jié)果顯示出PP2A在Ti顆粒誘導的小鼠骨溶解模型中的表達明顯高于空白對照組，且這種高表達趨勢呈現(xiàn)出時間依賴性（圖2B和F）。與PP2A一致，RANKL在Ti顆粒誘導的小鼠骨溶解模型中同樣高表達（圖2C和G），這也與人體滑膜染色的結(jié)果相符合。此外，我們觀察到在Ti顆粒誘導的小鼠骨溶解模型中存在更多數(shù)量的破骨細胞（圖2D和H）。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R687

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