【摘要】：目的：采用巴馬小型豬構(gòu)建豬背皮膚瘢痕模型,并使用自制復(fù)方青珠抗瘢痕膏(青蒿琥酯和珍珠水解液)作用于皮膚瘢痕,觀察用藥療效并檢測瘢痕組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的情況。評價小型豬皮膚瘢痕模型在抗瘢痕藥物研發(fā)中的應(yīng)用價值,探索復(fù)方青珠抗瘢痕膏治療模型皮膚瘢痕的效果。方法：制備含青蒿琥酯和珍珠水解液的抗瘢痕制劑命名為復(fù)方青珠抗瘢痕膏。選取健康雌性4月齡巴馬小型豬6只。采用自制溫控燙傷儀(100℃、20s),于豬背部制備燙傷創(chuàng)面。燙傷制備后傷口暴露,不做特殊處理。動物隨機將動物分為六組,分圈飼養(yǎng)：①未治療組,②基質(zhì)對照組,③珍珠水解液組,④青蒿琥酯組,⑤復(fù)方青珠抗瘢痕膏組,⑥硅酮凝膠組。于建模后第28日開始用藥,2次／日,連續(xù)用藥28日。建模后第56日處死動物,Nageschmidt法計算創(chuàng)面愈合率。切取瘢痕組織,收集標(biāo)本。采用HE染色觀察各組瘢痕上皮層、真皮層細(xì)胞及膠原纖維并顯微鏡下觀察瘢痕的厚度(上皮至真皮固有層)。Masson三色膠原染色,觀察膠原纖維束的排列情況及膠原纖維面密度計數(shù)。采取免疫組織化學(xué)方法檢測各組瘢痕組織Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)。熒光定量RT-PCR法檢測各組瘢痕組織Ⅰ、Ⅲ型膠原纖維mRNA的表達(dá)水平。采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行分析處理。結(jié)果：1、連續(xù)用藥28日后(燙傷制備后56天)未治療組與膏體基質(zhì)對照組瘢痕仍明顯高出于皮膚表面,顏色較深紅,質(zhì)地堅韌。珍珠水解液組瘢痕略高出皮膚表面,觸之質(zhì)中等偏軟,色澤較紅。青蒿琥酯組、復(fù)方青珠抗瘢痕膏組瘢痕低平,質(zhì)軟,色接近正常膚色。硅酮凝膠組瘢痕變平,顏色更接近正常皮膚顏色,質(zhì)地軟,表面平滑。2、HE染色可見珍珠水解液組、青蒿琥酯組、復(fù)方青珠膏組和硅酮凝膠組,出現(xiàn)不同程度的成纖維細(xì)胞數(shù)量減少,膠原纖維變稀疏,排列較整齊。其中,復(fù)方青珠抗瘢痕膏組效果最明顯；未治療組和基質(zhì)對照組上皮層及真皮層排列紊亂且厚度增加明顯,其中含有大量排列紊亂無章的膠原纖維,呈旋渦狀排列。連續(xù)用藥28天后,可以發(fā)現(xiàn)珍珠水解液組、青蒿琥酯組、復(fù)方青珠抗瘢痕膏組和硅酮凝膠組可以明顯抑制瘢痕的生長,其中復(fù)方青珠抗瘢痕膏組和硅酮凝膠組效果明顯。Masson三色膠原染色可見用藥后各組瘢痕中膠原纖維的密度減少,未見明顯的膠原漩渦及結(jié)節(jié)。3、免疫組織化學(xué)法：工型膠原蛋白在復(fù)方青珠抗瘢痕膏組、青蒿琥酯組、珍珠水解液組和硅酮凝膠組中的表達(dá)均較未治療組低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。基質(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；而Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)增加,復(fù)方青珠抗瘢痕膏組、青蒿琥酯組、珍珠水解液組和硅酮凝膠組與未治療組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),基質(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、熒光定量RT-PCR檢測后顯示：Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào),與未治療組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01),基質(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；而Ⅲ型膠原的mRNA表達(dá)則呈不同程度的上升,與未治療組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),基質(zhì)組與未治療組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1、珍珠水解液組、青蒿琥酯組和復(fù)方青珠抗瘢痕膏組作用于豬背瘢痕后均可以抑制瘢痕的增生,其中以復(fù)方青珠抗瘢痕膏組效果最理想。2、復(fù)方青珠抗瘢痕膏組可明顯抑制豬背瘢痕組織中Ⅰ型膠原沉積,一定程度上促進(jìn)Ⅲ型膠原分泌,使Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的表達(dá)更接近于正常皮膚。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R622

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本文編號：2642145