【摘要】：目的:1.對(duì)比含有H1047R(PIK3CA20號(hào)外顯子)突變的三陰性乳腺癌(TNBC)細(xì)胞與含有PIK3CA野生型(WT)的TNBC細(xì)胞以及陰性病毒(GFP)的TNBC細(xì)胞的生長(zhǎng)特性的異同,了解H1047R突變對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞的影響,并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。2.研究紫杉醇類化療藥物多西他賽對(duì)含有H1047R突變的TNBC細(xì)胞體內(nèi)、體外的抑制作用及其潛在的機(jī)制。方法:1.構(gòu)建PIK3CA-H1047R突變、WT型及GFP型MDA-MB-231細(xì)胞株,通過CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖、Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞侵襲能力、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡、Western Blot檢測(cè)PIK3CA突變對(duì)PI3K/Akt/mTOR細(xì)胞信號(hào)通路的影響、小鼠成瘤實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)含有H1047R突變的細(xì)胞的成瘤作用。2.通過應(yīng)用0.1%的多西他賽作用于WT、H1047R、GFP的MDA-MB-231細(xì)胞株,通過體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PIK3CA突變對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲能力、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以及PI3K/Akt/mTOR細(xì)胞信號(hào)通路的影響,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)多西他賽對(duì)細(xì)胞成瘤的影響。結(jié)果:1.通過CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期與凋亡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),含有H1047R突變的MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力、侵襲能力更強(qiáng),分裂期細(xì)胞增多,細(xì)胞早期凋亡增多,與WT組和GFP組對(duì)比均有顯著差異。Western Blot結(jié)果顯示,H1047R突變細(xì)胞內(nèi)磷酸化Akt和mTOR表達(dá)水平高于野生型組和病毒陰性對(duì)照組。2.成瘤結(jié)果顯示,H1047R突變細(xì)胞成瘤能力最強(qiáng),形成的腫瘤體積最大,但與其他兩組比較無(wú)顯著性差異。3,加入0.1%的多西他賽后,體外實(shí)驗(yàn)提示多西他賽能顯著抑制H1047R突變細(xì)胞增殖、侵襲能力,阻滯細(xì)胞于G2/M期,并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,抑制H1047R突變細(xì)胞內(nèi)磷酸化Akt和mTOR的表達(dá)。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,用藥后病毒對(duì)照組和突變組腫瘤都有縮小,而野生型組腫瘤大小變化不明顯,但三組之間并無(wú)顯著性差異。結(jié)論:1.含有H1047R突變的MDA-MB-231細(xì)胞增殖、侵襲性增強(qiáng),處于分裂期的細(xì)胞增多,早期凋亡增加,并顯著增加Akt和mTOR的磷酸化,提示含有H1047R突變的TNBC腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的能力較強(qiáng);2.多西他賽能顯著抑制含有H1047R突變的MDA-MB-231細(xì)胞增殖和遷移,并能使細(xì)胞阻斷在G2/M期,增加早期和晚期凋亡,提示多西他賽對(duì)于含有H1047R突變的TNBC作用效果更佳顯著,能收獲更好的療效;3.多西他賽能顯著抑制含有H1047R突變的MDA-MB-231細(xì)胞的Akt和mTOR的磷酸化,提示多西他賽可能通過作用于PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路來(lái)抑制TNBC細(xì)胞的增殖并影響細(xì)胞周期。
【圖文】：

圖２酶切結(jié)果電泳圖逡逑１：邋１０ｋｂＭａｒｋｅｒ（條帶自上而下依次為：１０ｋｂ、８ｋｂ、６ｋｂ、５ｋｂ、４ｋｂ、３．５ｋｂ、３ｋｂ、２．５ｋｂ、２ｋｂ、逡逑

放置于４°Ｃ冰箱中保存。逡逑－ＭＢ－２３１用完全培養(yǎng)基，在３７°Ｃ、生長(zhǎng)狀態(tài)，２？３ｄ換液，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)傳代，，２？３ｄ傳代１次。逡逑建逡逑－３ＦＬＡＧ－ＣＭＶ－ＥＧＦＰ逡逑ｅｌ逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2606588