【摘要】：目的:比較去白細(xì)胞富血小板血漿(P-PRP)與含白細(xì)胞富血小板血漿(L-PRP)對(duì)兔椎間盤(pán)髓核來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞(NPMSCs)增殖、分化、細(xì)胞外基質(zhì)和NF-κB信號(hào)通路激活的影響。方法:實(shí)驗(yàn)選取24只雌性,6-8個(gè)月齡,體重3-4kg新西蘭大白兔。每只大白兔分別抽取30ml動(dòng)脈血,隨機(jī)分為對(duì)照組、P-PRP組和L-PRP組。隨后提取兔椎間盤(pán)髓核來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞并鑒定。選取P2 NPMSCs在transwell細(xì)胞小室中與對(duì)應(yīng)的不同濃度(0%、5%、10%和20%Vol/Vol)的PRPs(P-PRP或L-PRP)共培養(yǎng)三天后,CCK-8檢查各組細(xì)胞增殖率。再選取各組P2細(xì)胞,分別加入各組對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基、10%P-PRP、10%L-PRP)共培養(yǎng)。14天后,使用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)測(cè)定各組細(xì)胞MSCs干性基因(Oct4,Nanog)、髓核細(xì)胞相關(guān)基因(Collagen II,Aggrecan)、炎癥因子(TNF-α,IL-1β)以及基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1,MMP-13)的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)測(cè)定TNF-α、IL-1β、MMP-1和MMP-13濃度;Western Blot檢測(cè)NF-κB/p65、Collagen II以及Aggrecan蛋白表達(dá);免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞Collagen II以及Aggrecan蛋白表達(dá)。結(jié)果:NPMSCs與PRPs共培養(yǎng)后,其增殖率表現(xiàn)出對(duì)PRPs劑量依賴性,其中在PRPs濃度10%時(shí)細(xì)胞增殖率最大(P0.05)。共培養(yǎng)兩周后,實(shí)驗(yàn)組(P-PRP組或L-PRP組)細(xì)胞形態(tài)由紡錘形樣細(xì)胞逐漸轉(zhuǎn)變成瘦長(zhǎng)梭形髓核樣細(xì)胞,同時(shí),實(shí)驗(yàn)組干細(xì)胞標(biāo)志基因(Oct-4,Nanog)的表達(dá)是對(duì)照組的30%,而髓核細(xì)胞胞相關(guān)基因(CollagenII,Aggrecan)的表達(dá),是對(duì)照組3至4倍(P0.05)。L-PRP中白細(xì)胞和炎癥因子濃度(TNF-α,IL-1β)明顯高于P-PRP組(P0.05)。與P-PRP組相比,L-PRP組細(xì)胞中炎癥因子(TNF-α,IL-1β)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1,MMP-13)以及NF-κB p65表達(dá)明顯增多(P0.05)。P-PRP組細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白(Collagen II,Aggrecan)表達(dá)明顯高于L-PRP組(P0.05)。結(jié)論:P-PRP和L-PRP均可以促進(jìn)NPMSCs增殖并誘導(dǎo)其成髓核樣細(xì)胞分化,剔除PRP中白細(xì)胞可以減少炎癥反應(yīng),避免細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的激活以及抑制細(xì)胞分解代謝反應(yīng)。
【圖文】：

結(jié)果與分析結(jié)果與分析RP 和全血成分上述來(lái)自各組新西蘭大白兔全血、P-PRP 和 L-PRP 經(jīng)自動(dòng)血液分析提示：L-PRP 中的白細(xì)胞濃度顯著高于全血（P＜0.05），而 P-PRP 中度顯著低于全血（P＜0.05）（圖 1a）；P-PRP 和 L-PRP 之間的血小板統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）（圖 1b）且 P-PRP 和 L-PRP 血小板濃度均高。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）結(jié)果反應(yīng)，L-PRP 中，炎癥因子 Tβ 明顯升高，如圖 1（c）和（d）所示，L-PRP 中 IL-1β和 TNF-α的水全血和 P-PRP，而 P-PRP 中 IL-1β和 TNF -α含量明顯低于全血。

東南大學(xué)碩士學(xué)位論文椎間盤(pán)髓核來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察從新西蘭大白兔椎間盤(pán)髓核以 50/cm2接種到一次性塑料培養(yǎng)瓶，加20% FBS、1%雙抗和 LG-DMEM），置于 37℃，5%C02靜置培養(yǎng)，經(jīng) 14 天培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形成葵花樣細(xì)胞集落不一，以多角形和長(zhǎng)梭形兩種細(xì)胞形態(tài)為主（圖 2a），傳代后 P1 代細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)多個(gè)散在分布的細(xì)胞集落（圖 2b），，P2 代細(xì)胞形態(tài)紡錘形，并以“鋪路石”樣形態(tài)生長(zhǎng)（圖 2c、d）。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R681.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 謝雪濤;施忠民;張長(zhǎng)青;;富血小板血漿的制備與臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2014年04期

本文編號(hào)：2605920