【摘要】：研究背景與目的帕金森病是一種比較常見的以神經(jīng)退行性病變?yōu)椴±砘A(chǔ),以大腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元進(jìn)行性丟失為特點(diǎn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。由于神經(jīng)干細(xì)胞具有修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)損傷的可能性,干細(xì)胞移植已成為治療神經(jīng)退行性疾病的一種很有前途的策略。但是,干細(xì)胞移植面臨著移植后干細(xì)胞不正常分化和存活率較低的兩大難題。研究發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞的存活和分化與干細(xì)胞的微環(huán)境密切相關(guān)。懸浮培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞能夠部分自我分化,并形成包含干細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)元細(xì)胞的細(xì)胞球,這些部分分化的細(xì)胞能夠預(yù)先形成干細(xì)胞微環(huán)境。因此,以神經(jīng)球替代單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞移植可能具有更好的效果。另外,帕金森病治療的一個(gè)關(guān)鍵技術(shù)就是腦深部電刺激治療,有研究發(fā)現(xiàn)電刺激能夠促進(jìn)神經(jīng)的再生。目前,腦深部電刺激對于小鼠帕金森模型神經(jīng)發(fā)生的研究尚無報(bào)告。因此,通過本次實(shí)驗(yàn),希望能夠?qū)崿F(xiàn)以下目的:系統(tǒng)的研究神經(jīng)干細(xì)胞球在體外生長和分化以及其內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn),并比較單個(gè)神經(jīng)干細(xì)胞和神經(jīng)球移植治療效果的不同及其可能的影響因素;設(shè)計(jì)出簡單實(shí)用的小鼠腦深部電刺激電極;探索神經(jīng)干細(xì)胞移植聯(lián)合腦深部電刺激治療帕金森病的可能;最終,尋找一種能夠提高干細(xì)胞移植后細(xì)胞存活和治療效果的方法。研究方法1.神經(jīng)干細(xì)胞源自孕14-15天的轉(zhuǎn)基因C57/JeGFP小鼠。通過Western blot技術(shù)、細(xì)胞流式分析、透射電鏡技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞耐氧化損傷實(shí)驗(yàn)等方法研究神經(jīng)干細(xì)胞球體外培養(yǎng)時(shí)生長特點(diǎn),并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)比較移植后單個(gè)細(xì)胞和神經(jīng)球?qū)π∈笈两鹕∧Ｐ偷闹委熥饔谩?.使用帶有絕緣涂層的銅絲和導(dǎo)電滑環(huán)設(shè)計(jì)出針對小鼠的可持續(xù)通電的電刺激裝置,并觀察電刺激對小鼠活動(dòng)的影響,以及持續(xù)電刺激對神經(jīng)發(fā)生的影響。3.結(jié)合神經(jīng)干細(xì)胞移植以及電刺激技術(shù),進(jìn)一步探索干細(xì)胞移植聯(lián)合腦深部電刺激技術(shù)對小鼠帕金森病模型治療作用。結(jié)果1.神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中形成的神經(jīng)干細(xì)胞球其內(nèi)部細(xì)胞能夠部分分化成成熟的神經(jīng)元,并形成縫隙連接、橋粒連接和突觸聯(lián)系。2.神經(jīng)球相較于單個(gè)細(xì)胞移植能使移植的細(xì)胞更好的存活并對小鼠帕金森模型起到好的治療作用。3.使用漆包超細(xì)銅絲和導(dǎo)電滑環(huán)設(shè)計(jì)出了小鼠專用的腦深部電刺激電極。更重要是,通過對安裝電極的10只小鼠連續(xù)10天的電刺激觀察,沒有發(fā)現(xiàn)電極部位感染或者電極松動(dòng)的情況。4.神經(jīng)干細(xì)胞球聯(lián)合腦深部電刺激技術(shù)能夠起到對帕金森病小鼠更好的治療效果。結(jié)論1.神經(jīng)球內(nèi)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中已經(jīng)有部分分化并形成細(xì)胞間連接,形成的類似干細(xì)胞微環(huán)境利于移植后干細(xì)胞的存活。2.我們設(shè)計(jì)的腦深部電刺激電極簡單易行,可用于小鼠的持續(xù)電刺激。3.干細(xì)胞移植聯(lián)合腦深部電刺激能夠?qū)ε两鹕⌒∈笃鸬礁玫闹委熜Ч?br>【圖文】：

功能得到有效改善，，短期隨訪結(jié)果令人滿意，并很快在臨床得到推廣。但長期隨逡逑訪結(jié)果卻顯示，半月板全切除術(shù)后可引起長期膝關(guān)節(jié)功能不全，遠(yuǎn)期并發(fā)膝關(guān)節(jié)逡逑退變、骨關(guān)節(jié)炎［４］（圖１－１）。逡逑ＵRG１逡逑半月板切除邐骨關(guān)節(jié)炎邐關(guān)節(jié)置換逡逑圖１－１半月板切除術(shù)后繼發(fā)骨關(guān)節(jié)炎模式圖逡逑７逡逑

３％透明質(zhì)酸逡逑＿糖蛋白口應(yīng)蛋白逡逑圖１－４半月板細(xì)胞外基質(zhì)的組成成分逡逑從微觀空間結(jié)構(gòu)觀察：半月板的空間結(jié)構(gòu)是由特殊的膠原纖維排列維持的，逡逑主要是由沿著其半圓形結(jié)構(gòu)的環(huán)形纖維和間隔排列的輻射狀纖維維持（圖１－５）。逡逑“取向”性的膠原纖維排列和半月板的生物力學(xué)性能密切相關(guān)。因此重建空間仿生逡逑結(jié)構(gòu)的半月板的再生極其關(guān)鍵。逡逑酬面射棚}卞義匣沸謂涸ㄗ聰宋義稀懊ㄏ宋卞危卞危插危沖義賢跡保蛋朐擄逑宋帕懈磐煎義希保礱媯玻“宀�，３．中衙匃体层辶x習(xí)朐擄逋夤坌翁厥�，大小、尺度精志G�；微观组成成分竻矙熏各成贩N義霞浞⒒酉嗷シ蠢『透悍蠢∩δ芎托畔⒋跡歡撈氐奈⒐劭占浣峁貢Ｖち肆ρу義顯睪珊痛藎ㄍ跡保叮�。因此，从临磻K窖У慕嵌確治觶嘶指湊５南ス亟詮﹀義夏�，眳Q敕律０朐擄宓耐廡�、微观组成成分及其微观空间结构，构建半該镥辶x咸媧锘蜃櫓こ貪朐擄�。辶x希保板義

本文編號：2597023