【摘要】：目的:模擬出生窒息,建立新生大鼠窒息模型,研究新生大鼠窒息模型的可行性,并觀察七氟烷預(yù)處理對窒息新生大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元自噬和遠期認知功能的影響,探討七氟烷預(yù)處理可能的腦保護作用和機制。方法:1、參考Grojean和余加林等人的方法,將7日齡(P7)的SD大鼠持續(xù)呼吸100%氮氣10min,建立新生大鼠窒息模型,并通過神經(jīng)行為學(xué)觀察、動脈血氣分析、短期神經(jīng)功能評價、腦水腫的測定以及光鏡下的形態(tài)學(xué)鑒定。2、將282只7日齡大鼠隨機分成對照組(C組),缺氧組(H組),七氟烷預(yù)處理組(S組),采用免疫組化、western blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC3的變化;HE染色和DAPI染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的病理變化;P21行懸吊實驗,P23行平衡木實驗,P28—P33行水迷宮實驗。結(jié)果:1、7日齡大鼠持續(xù)呼吸100%氮氣10min作為造模缺氧時間,缺氧過程中大鼠皮膚紫紺,異常煩躁、肢體抽動、昏迷,二便失禁等異常的神經(jīng)行為學(xué)表現(xiàn)。大鼠隨缺氧時間延長SPO2下降,酸中毒,動脈血氧分壓降低和二氧化碳分壓升高。與正常組相比,模型組腦含水量升高(P0.05)。與正常組相比,模型組完成趨地反射和懸崖逃避反射時間較長(P0.05)。蘇木精素-伊紅染色顯示模型組大鼠皮質(zhì)和海馬神經(jīng)元嚴重損傷。2、HE染色顯示C組海馬CA1區(qū)形態(tài)、細胞結(jié)構(gòu)正常;H組海馬CA1區(qū)結(jié)構(gòu)明顯異常,細胞排列紊亂,成片神經(jīng)元細胞核固縮;S組海馬CA1區(qū)異常程度較H組輕。DAPI染色顯示三組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的細胞核形態(tài)改變的數(shù)量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與C組比較,H組和S組CA1區(qū)發(fā)生細胞核形態(tài)改變的細胞數(shù)量明顯增多(P0.05);S組CA1區(qū)發(fā)生細胞核形態(tài)改變的細胞數(shù)量較H組少(P0.05)。海馬CA1區(qū)LC3-Ⅱ免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果:LC3-Ⅱ表達定位于神經(jīng)元的胞漿,C組各個時間點基本無陽性表達細胞;七氟烷預(yù)處理1h,30min后有少量陽性細胞表達(P0.05);與C組比較,H組和S組從缺氧后6h可見較多LC3-Ⅱ陽性細胞表達,12h表達明顯增多,顏色變深,24h到達高峰,后逐漸下降,顏色變淺;S組缺氧后各個時間點LC3-Ⅱ陽性表達較H組少(P0.05)。LC3的western blot蛋白半定量結(jié)果:C組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值在各時間點無明顯變化;七氟烷預(yù)處理1h,30min后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高(P0.05);與C組比較,H組和S組缺氧后6h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高,24h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值達到最大值,后逐漸減小。與H組相比,S組缺氧后各時間點LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值較低(P0.05)。懸吊實驗和平衡木實驗,三組大鼠間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。水迷宮實驗定向航行中,與C組相比,H組和S組平均逃逸潛伏期時間明顯延長(P0.05),與H組相比,S組第三天至第五天平均逃逸潛伏期時間較短(P0.05);與C相比,H組和S組穿越平臺次數(shù)明顯減少(P0.05);與H組相比,S組穿越平臺次數(shù)增多(P0.05)。結(jié)論:1、7日齡的大鼠持續(xù)呼吸100%氮氣10min,可建立與人類新生兒缺氧性腦損傷相似的新生鼠窒息模型。2、七氟烷預(yù)處理的腦保護作用機制可能與其先上調(diào)神經(jīng)元的自噬水平使其缺氧后的自噬水平降低有關(guān)。3、七氟烷預(yù)處理能夠減少窒息新生鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的死亡。4、七氟烷預(yù)處理能夠改善窒息新生鼠遠期的認知功能。
【圖文】：

圖 1 缺氧裝置 過程生理和行為觀察。 亞組異常神經(jīng)行為和死亡率，確定無氧時間后，觀神經(jīng)行為、呼吸以及皮膚顏色的變化。 檢測 鼠分為 0min、2min、4min、6min、8min、10min 亞 時，迅速將大鼠置于其中，分別呼吸無氧氣體 2min達到預(yù)定缺氧時間后，立即取出大鼠用肝素潤過 1m 0.1ml 血后，立即封堵針頭，接著立即行血氣檢測血氣分析不能完成），缺氧過程中大鼠死亡等情況，

大鼠置于 100%氮氣的環(huán)境中，約 15s 后，大鼠異，隨后活動明顯減少。缺氧 6min 組，大鼠空氣加，實驗中無大鼠死亡，飼養(yǎng) 30 天大鼠無死亡約 5min 后，肢體活動逐漸增加，，實驗中無大鼠氧 10min 組，空氣復(fù)氧約 8min 后，肢體活動逐漸亡，飼養(yǎng) 30 天過程中大鼠無死亡，死亡率為 10鼠 7 只死亡，飼養(yǎng) 30 天，又有 1 只大鼠死亡，死亡程中 9 只大鼠死亡，飼養(yǎng)過程中無死亡，死亡率在缺氧時間約 15s 后，大鼠異常煩躁不安，四處后固定于一位置，伴隨肢體抽動，持續(xù) 5min—8m開始急促，后呼吸次數(shù)逐漸減少，直至零星喘氣，最后變成紫紺；大鼠缺氧過程中伴隨著二便失
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 劉琴;李凌云;喬世剛;魏興;謝紅;王琛;;七氟烷預(yù)處理對缺氧/復(fù)氧損傷的心肌細胞H9c2 LC3蛋白表達的影響[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

2 葉治;郭曲練;王鍔;;七氟醚遲發(fā)性預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血損傷后NF-κB表達的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

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4 莫國梁;余加林;李祿全;張曉萍;;新生大鼠缺氧性腦損傷新模型[J];中國當代兒科雜志;2008年05期

本文編號：2583666