【摘要】：目的:研究外周血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(PBMSCs)在3D多孔支架中的生物學(xué)行為。方法:將兔PBMSCs接種到豬脫礦松質(zhì)骨(DCB)支架中,并以骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)以及關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞(ACCs)進(jìn)行對(duì)照,通過掃描電鏡觀察3D環(huán)境中的細(xì)胞形態(tài)和分布;通過Live/Dead染色檢測(cè)細(xì)胞活性,Hoechst33258法檢測(cè)DNA含量,二甲基亞甲基藍(lán)(DMMB)法檢測(cè)糖胺聚糖(GAG)含量,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和免疫熒光法檢測(cè)二型膠原(COL 2)表達(dá)、RT-PCR法定量分析軟骨分化相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果:掃描電鏡(SEM)觀察顯示3種細(xì)胞在支架中均勻貼附,Live/Dead染色顯示接種3天后3種細(xì)胞存活率相似(P0.05),7天后3種細(xì)胞增殖能力以及DNA含量無明顯差異(P0.05)。PBMSCs和BMMSCs均較ACCs分泌更多GAG,但COL 2分泌量相似。此外,PBMSCs和BMMSCs的聚集蛋白聚糖(AGC),COL 2和堿性磷酸酶(ALP)等基因表達(dá)均明顯上調(diào)(P0.05);而ACCs組這些基因的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05)。MSCs組的COL 1表達(dá)趨于增加,而ACCs組中的表達(dá)趨于減少(P0.05)。在成軟骨誘導(dǎo)21天時(shí),PBMSCs和BMMSCs的COL 2和ALP表達(dá)較ACCs升高(P0.05),AGC和COL 1表達(dá)與ACCs相比無顯著差異(P0.05)。結(jié)論:外周血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在異種脫礦松質(zhì)骨支架中具有與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似的良好的增殖和成軟骨能力,但體外培養(yǎng)條件下依然存在肥大軟骨細(xì)胞基因表達(dá)的現(xiàn)象,需要對(duì)培養(yǎng)條件進(jìn)一步優(yōu)化。

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