【摘要】：目的應用脂質(zhì)體介導黏著斑激酶相關非激酶(FRNK)表達質(zhì)粒轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞,探討FRNK抑制黏著斑激酶(FAK)磷酸化對瘢痕疙瘩成纖維細胞凋亡的影響,及其與FAK-ERK信號轉導通路、Ⅰ型膠原α1鏈(COL1A1)和Ⅲ型膠原α1鏈(COL3A1)之間的關系。方法(1)用Western blotting及RT-PCR檢測正常皮膚和瘢痕疙瘩中FRNK蛋白及m RNA水平;(2)應用體外細胞培養(yǎng)技術,培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞,在脂質(zhì)體介導下用FRNK表達質(zhì)粒瞬時轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞,用膜聯(lián)蛋白/碘化丙啶雙標記流式細胞術檢測細胞的凋亡,用Western blotting檢測FAK、p-FAK、FRNK、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1(ERK1)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)、p-ERK1、p-ERK2等相關指標的蛋白質(zhì)表達。用RT-PCR方法檢測FAK、ERK、COL1A1、COL3A1等相關指標的m RNA表達。結果(1)瘢痕疙瘩組織塊中的FRNK蛋白表達低于正常皮膚(0.14±0.08 vs 0.33±0.06),差異有顯著意義(P0.05)。瘢痕疙瘩組織塊中FRNK m RNA表達低于正常皮膚(0.30±0.04 vs 1.04±0.06),差異有顯著意義(P0.05)。(2)FRNK表達質(zhì)粒轉染瘢痕疙瘩成纖維細胞于轉染后48h FRNK蛋白含量達最高,72h表達下降。(3)與空質(zhì)粒組相比,FRNK組FAK、ERK轉錄及翻譯水平均下降,FAK及ERK磷酸化水平也均下降(P0.05)。(4)FRNK組與空質(zhì)粒組相比,COL1A1、COL3A1 m RNA的表達水平均下降(0.23±0.10 vs 0.85±0.02,0.60±0.02 vs 1.06±0.10,P0.01),而空質(zhì)粒組與對照組、脂質(zhì)體組間無明顯差別(P0.05)。(5)FRNK組細胞凋亡率明顯高于對照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組(36.63±4.89 vs 3.87±0.07 vs 3.62±0.54 vs 3.72±0.08,P0.05),而對照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組之間無明顯差別(P0.05)。結論(1)瘢痕疙瘩組織中,FRNK蛋白的減少導致其促進成纖維細胞(FBs)凋亡作用減弱;(2)瘢痕疙瘩中FRNK可能通過抑制FAK磷酸化及下調(diào)FAK活性,并下調(diào)FAK-ERK信號通路轉導來促進細胞凋亡;(3)瘢痕疙瘩中FRNK促進纖維細胞凋亡,可能導致膠原的生成下降。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R622

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