【摘要】：目的應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)黏著斑激酶相關(guān)非激酶(FRNK)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞,探討FRNK抑制黏著斑激酶(FAK)磷酸化對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡的影響,及其與FAK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、Ⅰ型膠原α1鏈(COL1A1)和Ⅲ型膠原α1鏈(COL3A1)之間的關(guān)系。方法(1)用Western blotting及RT-PCR檢測(cè)正常皮膚和瘢痕疙瘩中FRNK蛋白及m RNA水平;(2)應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞,在脂質(zhì)體介導(dǎo)下用FRNK表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞,用膜聯(lián)蛋白/碘化丙啶雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡,用Western blotting檢測(cè)FAK、p-FAK、FRNK、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(ERK1)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)、p-ERK1、p-ERK2等相關(guān)指標(biāo)的蛋白質(zhì)表達(dá)。用RT-PCR方法檢測(cè)FAK、ERK、COL1A1、COL3A1等相關(guān)指標(biāo)的m RNA表達(dá)。結(jié)果(1)瘢痕疙瘩組織塊中的FRNK蛋白表達(dá)低于正常皮膚(0.14±0.08 vs 0.33±0.06),差異有顯著意義(P0.05)。瘢痕疙瘩組織塊中FRNK m RNA表達(dá)低于正常皮膚(0.30±0.04 vs 1.04±0.06),差異有顯著意義(P0.05)。(2)FRNK表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞于轉(zhuǎn)染后48h FRNK蛋白含量達(dá)最高,72h表達(dá)下降。(3)與空質(zhì)粒組相比,FRNK組FAK、ERK轉(zhuǎn)錄及翻譯水平均下降,FAK及ERK磷酸化水平也均下降(P0.05)。(4)FRNK組與空質(zhì)粒組相比,COL1A1、COL3A1 m RNA的表達(dá)水平均下降(0.23±0.10 vs 0.85±0.02,0.60±0.02 vs 1.06±0.10,P0.01),而空質(zhì)粒組與對(duì)照組、脂質(zhì)體組間無(wú)明顯差別(P0.05)。(5)FRNK組細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組(36.63±4.89 vs 3.87±0.07 vs 3.62±0.54 vs 3.72±0.08,P0.05),而對(duì)照組、脂質(zhì)體組、空質(zhì)粒組之間無(wú)明顯差別(P0.05)。結(jié)論(1)瘢痕疙瘩組織中,FRNK蛋白的減少導(dǎo)致其促進(jìn)成纖維細(xì)胞(FBs)凋亡作用減弱;(2)瘢痕疙瘩中FRNK可能通過(guò)抑制FAK磷酸化及下調(diào)FAK活性,并下調(diào)FAK-ERK信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)促進(jìn)細(xì)胞凋亡;(3)瘢痕疙瘩中FRNK促進(jìn)纖維細(xì)胞凋亡,可能導(dǎo)致膠原的生成下降。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R622

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本文編號(hào)：2558378