發(fā)布時(shí)間：2019-09-09 08:39

【摘要】：[研究背景]近年來自體脂肪移植(Autologous fat transplantation,AFT)在軟組織缺損修復(fù)及美容外科中的應(yīng)用越來越多。自體脂肪組織因其無免疫排斥反應(yīng)、取材便利、操作便捷等優(yōu)點(diǎn)已成為一種優(yōu)良的填充材料,但因其過高的吸收率導(dǎo)致的不確定手術(shù)效果限制了其廣泛應(yīng)用。多年的研究發(fā)現(xiàn)移植后的脂肪細(xì)胞在血管網(wǎng)重建之前一直處于缺血缺氧的環(huán)境中,此類環(huán)境極易誘使脂肪細(xì)胞發(fā)生凋亡壞死。因此如何加速其血運(yùn)重建過程及抑制脂肪細(xì)胞凋亡壞死是目前提高自體脂肪移植存活率研究的重點(diǎn)。N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)因其在抗氧化、抑制細(xì)胞凋亡方面的顯著作用現(xiàn)已越來越多的應(yīng)用于器官移植、心肌缺血再灌注損傷治療等方面。NAC可以抑制多種細(xì)胞的凋亡過程,那么它是否同樣可以抑制移植后脂肪細(xì)胞的凋亡從而提高自體脂肪移植的存活率。本實(shí)驗(yàn)將通過動(dòng)物自體脂肪移植模型來確定NAC對(duì)自體脂肪移植存活率的作用并初步探索其可能的作用機(jī)制。[研究目的]1.明確自體脂肪移植術(shù)后脂肪組織的動(dòng)態(tài)變化情況。2.明確NAC是否可以提高自體脂肪移植的存活率。3.探索NAC對(duì)自體脂肪移植存活率作用的機(jī)制。[研究方法及結(jié)果]1.脂肪移植術(shù)后的脂肪組織變化情況:方法:健康成年雌性SD大鼠于腹股溝處提取脂肪組織,處理成脂肪顆粒后注入大鼠背部皮下。術(shù)后2周、4周、6周及8周進(jìn)行取材,通過大體觀察、體積測(cè)量、HE染色等方法,觀察自體脂肪移植術(shù)后脂肪組織的體積以及組織學(xué)變化。結(jié)果:移植脂肪組織隨著時(shí)間的推移,體積逐漸變小,顏色逐漸變暗,質(zhì)地變硬,移植脂肪組織周圍于2周開始出現(xiàn)結(jié)締組織包膜一直維持到8周,隨著包膜的出現(xiàn),大量的脂肪細(xì)胞以及新生血管開始形成,同時(shí)纖維間隔也逐漸形成,8周時(shí)可見大量完整成熟脂肪細(xì)胞,同時(shí)伴有新生血管網(wǎng)的生成。周圍區(qū)的脂肪細(xì)胞始終保持著良好的生長發(fā)育,新生血管也從周圍區(qū)開始向中央?yún)^(qū)方向生長,中央?yún)^(qū)2周時(shí)絕大部分細(xì)胞就已經(jīng)壞死,形成大量的壞死空腔,未見成熟脂肪細(xì)胞。2.NAC對(duì)于AFT存活率的作用:方法:20只健康成年雌性SD大鼠于腹股溝處提取脂肪組織,處理成1ml顆粒脂肪,分為兩組分別注入大鼠背部脊柱兩側(cè)皮下,左側(cè)為實(shí)驗(yàn)組,注入0.5ml脂肪組織+0.5ml濃度為60 μmol/L的NAC,右側(cè)為對(duì)照組,注入0.5ml脂肪組織+0.5ml生理鹽水。分別于術(shù)后2周、4周、6周及8周進(jìn)行取材,通過大體觀察、體積測(cè)量、HE染色、CD31染色等方法對(duì)移植脂肪組織形態(tài)、體積、存活率、脂肪細(xì)胞、新生血管情況等進(jìn)行評(píng)估,所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析,明確NAC對(duì)AFT存活率的作用。結(jié)果:①兩組移植脂肪組織均隨著時(shí)間的推移出現(xiàn)體積減小的情況,體積測(cè)量結(jié)果顯示所有時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組體積均高于對(duì)照組。②兩組脂肪細(xì)胞數(shù)均隨著時(shí)間的推移逐漸增多,細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示所有時(shí)間段內(nèi)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)均高于對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的形態(tài)、完整性以及排列緊密程度均好于對(duì)照組。③兩組血管數(shù)均隨著時(shí)間的推移逐漸增多,血管計(jì)數(shù)結(jié)果顯示所有時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組血管數(shù)均高于對(duì)照組,兩組血管均由少變多,并形成血管網(wǎng)包圍移植組織,血管生成均由周圍區(qū)向中央?yún)^(qū)發(fā)展。3.NAC對(duì)于AFT存活率作用機(jī)制的探索:方法:研究主要通過移植脂肪細(xì)胞凋亡率以及脂肪細(xì)胞內(nèi)ROS水平方面探索NAC提高AFT存活率的可能機(jī)制。利用Annexin V/PI雙染色法處理脂肪細(xì)胞,使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),明確實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的移植脂肪細(xì)胞凋亡率;利用DCFH-DA染色脂肪細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè),明確脂肪細(xì)胞內(nèi)ROS水平。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,明確NAC對(duì)于移植脂肪細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞內(nèi)ROS水平的作用。結(jié)果:①凋亡率結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組凋亡率低于對(duì)照組,隨著時(shí)間的推移凋亡率逐漸降低并趨于穩(wěn)定。②細(xì)胞內(nèi)ROS水平結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組ROS水平低于對(duì)照組,隨著時(shí)間的推移ROS水平逐漸增加,但增加幅度實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組。[研究結(jié)論]1.自體移植脂肪組織隨著時(shí)間的推移出現(xiàn)體積減小、顏色變暗,脂肪組織周圍伴有結(jié)締組織包膜包裹,脂肪細(xì)胞不斷再生并逐漸穩(wěn)定,新生血管逐漸增多。2.NAC可以更好的保留自體移植的脂肪組織,促進(jìn)脂肪細(xì)胞的再生和新生血管的生長。3.NAC可以減少自體移植脂肪細(xì)胞內(nèi)ROS水平進(jìn)而降低移植脂肪細(xì)胞的凋亡率。4.NAC可以增加自體移植脂肪的存活率,加速移植組織的重建進(jìn)程。
【圖文】：

Ｌ邐Ｍ逡逑圖１待提取的脂肪組織邐圖２提取的脂肪組織逡逑圖１和圖２脂肪標(biāo)本中可明顯看到有數(shù)量較多的血管生長，整體呈淡黃色，逡逑周圍有包膜包裹。逡逑．５０－邐９逡逑ｇ逡逑卜逡逑＾邋．２０－逡逑．１０－逡逑１邐２邐３邐４邐５逡逑ｔｉｍｅ逡逑圖３脂肪體積曲線圖逡逑圖３中可清晰看到移植脂肪體積隨著時(shí)間變化逐漸減少，第２周時(shí)降幅最大，逡逑１８逡逑

圖３脂肪體積曲線圖逡逑圖３中可清晰看到移植脂肪體積隨著時(shí)間變化逐漸減少，，第２周時(shí)降幅最大，逡逑
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R622

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5 李R

本文編號(hào)：2533490