【摘要】：軟骨退變性疾病主要特征包括軟骨損傷,滑膜纖維化,軟骨下骨硬化。創(chuàng)傷、炎癥、免疫系統(tǒng)異常等因素均會(huì)引發(fā)軟骨損傷和退行性變,導(dǎo)致關(guān)節(jié)活動(dòng)障礙。當(dāng)前,臨床上,無論口服補(bǔ)充、營(yíng)養(yǎng)軟骨素類藥物(氯基葡萄糖、軟骨素)、關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射潤(rùn)滑劑(各種劑型玻璃酸鈉),還是關(guān)節(jié)鏡下清理軟骨移植及微骨折術(shù)等治療手段,均不能實(shí)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)炎(OA)引發(fā)的軟骨退行性損傷后透明軟骨的再生修復(fù)。因此,深入研究關(guān)節(jié)軟骨退變的機(jī)理,確定治療靶點(diǎn)進(jìn)行早期預(yù)防顯得尤為重要。OA軟骨退變?cè)从谲浌羌?xì)胞外基質(zhì)(ECM)降解。當(dāng)前認(rèn)為,主要有兩類酶參與分解退變軟骨的基質(zhì)：一類是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs),另一類是帶有血小板凝血酶敏感蛋白結(jié)構(gòu)域的解聚素與金屬蛋白酶(ADAMTS)。目前,關(guān)于MMPs誘導(dǎo)OA的機(jī)理報(bào)道相對(duì)較多,而ADAMTS調(diào)控OA軟骨退變細(xì)胞外基質(zhì)降解的機(jī)制研究報(bào)道卻比較匱乏,尤其是結(jié)合關(guān)節(jié)鏡分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)研究ADAMTS在OA發(fā)生中的作用機(jī)制亟待闡釋。本課題以O(shè)A軟骨退變?yōu)榛A(chǔ),針對(duì)主要參與基質(zhì)降解的ADAMTS進(jìn)行研究,旨在通過探索ADAMTS調(diào)控OA軟骨退變作用機(jī)理,為今后OA臨床藥物應(yīng)用提供理論依據(jù),為軟骨退變預(yù)防及微創(chuàng)介入治療提供解決方案。方法：第一部分,OA患者全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)前關(guān)節(jié)鏡分級(jí),標(biāo)本組織病理學(xué)染色評(píng)估,測(cè)量軟骨退變不同分級(jí)ADAMTS、SRY基因9(SRY-related high mobility group-box gene 9, SOX9)及軟骨基質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)水平并進(jìn)行相關(guān)性分析；觀察SOx9在早期OA中調(diào)控ADAMTS的表達(dá)。第二部分,分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞,轉(zhuǎn)染miR-30a或其他調(diào)控基因,予以[L-1β干預(yù),測(cè)活性及轉(zhuǎn)錄因子募集到miR-30a啟動(dòng)子的能力,并分析miR-30a與ADAMTS等基因的相關(guān)性。第三部分,予以堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)刺激處理,組織學(xué)方法及分子生物學(xué)技術(shù)評(píng)估ADAMTS表達(dá),并采用成管實(shí)驗(yàn)技術(shù)及小動(dòng)物micro-CT觀察血管生成及OA退變情況。結(jié)果：1)ADAMTS在OA軟骨退變?cè)缙诒磉_(dá)抑制,而SOX9在OA早期表達(dá)升高；SOX9能夠抑制ADAMTS的表達(dá)；在OA早期退變的軟骨組織中,SOX9知ADAMTS呈負(fù)相關(guān)。2) miR-30a可以靶向抑制ADAMTS-5蛋白水平表達(dá)；miR-30a在OA患者中表達(dá)下調(diào),并與ADAMTS-5表達(dá)、HSS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)；IL-1p上調(diào)激活蛋白(activator protein, AP-1)水平,并能夠招募AP-1至miR-30a啟動(dòng)子上.從而抑制miR-30a的表達(dá)；IL-1p通過激活A(yù)P-1表達(dá)參與miR-30a調(diào)控ADAMTS-5表達(dá)及軟骨基質(zhì)降解。3) Runx2能夠正向調(diào)控ADAMTS表達(dá), bFGF可募集NF-κB p65至miR-93啟動(dòng)子,從而促進(jìn)ADAMTS表達(dá)；OA軟骨中miR-93與Runx2、ADAMTS呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)；bFGF/NF-KB能通過miR-93調(diào)控血管生成；miR-93或bFGF受體抑制劑注射至小鼠關(guān)節(jié)腔可改善OA軟骨損傷程度,并且聯(lián)合注射miR-93和bFGF受體抑制劑能夠顯著改善OA病變程度。結(jié)論：SOX9在OA早期抑制ADAMTS表達(dá),提示OA早期為代償期,SOX9可作為OA早期治療的重要基因；IL-1β/AP-1/miR-30a/ADAMTS-5軸能夠調(diào)節(jié)OA軟骨基質(zhì)降解,miR-30a能夠作為OA治療潛在靶點(diǎn)；bFGF/NF-KB信號(hào)通路交互調(diào)控ADAMTS參與軟骨退變病程, miR-93可為OA提供有效治療手段。
【圖文】：

子上抑制ｍｉＲ－２化的表達(dá)［４１１。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)ＡＰ－１能夠通過結(jié)合在逡逑ｍｉＲ－３０ａ的啟動(dòng)子上從而抑制ｍｉＲ－３０ａ的表達(dá)，顯示ＡＰ－１是ｍｉＲ－３０ａ的直接抑制因逡逑子（圖１８）。然而，實(shí)驗(yàn)也彰顯了ＡＰ－１抑制ｍｉＲＮＡ轉(zhuǎn)錄活性的機(jī)理研究仍需深入。逡逑Ｏａｔａｏｗｔｈｒｌｔｉ＊邐／邐！邐0邋ｌ－ｌｐ逡逑ｉ邋。、＂逡逑Ｂｏｎ，邐，逡逑Ｓｙｎｏｖｉａｌ邐＾邋Ｉ逡逑ｍｅｍｂｒａｎｔ逡逑＾３＇邐Ｃ－ｆＯｆ邐ＡＰ－１逡逑＼邋ｍｍ邋／Ａ邐？Ｈ邋…逡逑！邋ｗ邐！邋ｊ逡逑／邋進(jìn)＾邐Ａｒ邐ＡＤＡＭＴＭ逡逑ｉｌｋ．邐Ｉ逡逑／＾ｐｌｌ邐Ｉ邋＜ｃ＾ｐ邋＿＿？方疼逡逑Ｃｒｔｉｌａｇ．邐，一廠邐ｊ邋＇ＣＯＬ２Ａ１邋＼邐＾邋Ｉ邋ｊ逡逑Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ邐；邐ｉ邐ｉ邐ｊ逡逑＇＇Ｌ邐？邐ｉ逡逑圖１８邋Ｉ＾ｉｐ／ＡＰ－ｌ／ｍｉＲ－３０ａ／ＡＤＡＭＴＳ－５巧在ＯＡ病程中調(diào)控軟骨基質(zhì)降解的模式困逡逑圖注：化－ｌｐ能夠在人軟骨細(xì)胞中激活ＡＰ－１邋（ｃ－ｊｕｎ／ｃ－扣Ｓ）。ＡＰ－１邋（ｃ－ｊｕｎ／ｃ－ｆｏｓ）澈活后能夠逡逑通過募集到ｍｉＲ－３０ａ的啟動(dòng)子上抑制ｍｉＲ－３０ａ的表達(dá)。ｍｉＲ－３０ａ的抑制能夠巧金ＡＤＡＭＴＳ－５逡逑的表達(dá)。ＡＤＡＭＴＳ－５上巧后能夠增加ＥＣＭ標(biāo)志物的降解

Ｗ及基質(zhì)降解反應(yīng)，提示ｍｉＲ－９３參與０Ａ進(jìn)程的重要作用（圖１３）。雖然ｂＦＧＦ、逡逑ＮＦ－ｋＢ、ｍｉＲ－９３、Ｒｕｎｘ２和ＡＤＡＭＴＳ能夠參與ＯＡ病程，，具體的分子生物學(xué)機(jī)逡逑制仍需進(jìn)一步研究。逡逑我們的研究證實(shí)了邋ｍｉＲ－９３通過祀向Ｒｕｎｘ２的表達(dá)從而抑制ｂＦＧＦ介導(dǎo)的逡逑ＡＤＡＭＴＳ激活。ｍｉＲ－９３在ＯＡ患者中的低表達(dá)與Ｒｕｎｘ２、ＡＤＡＭＴＳ７和逡逑ＡＤＡＭＴＳ１２邋呈負(fù)相關(guān)。綜上，結(jié)果說明邋ｂＦＧＦ／ＮＦ－ＫＢ／ｍｉＲ－９３／Ｒｕｎｘ２／ＡＤＡＭＴＳｓ逡逑軸在ＯＡ進(jìn)展過程中扮演重要角色，為下一步臨床診療和ＯＡ干預(yù)提供支持。逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R684.3

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本文編號(hào)：2531658