【摘要】：目的:回顧性分析已納入本研究但尚未進(jìn)行基因診斷的9個骨硬化癥家系/(無家系)先證者的臨床資料;對所有臨床診斷或者擬診常染色體顯性遺傳骨硬化癥的先證者進(jìn)行CLCN7基因篩查。對于CLCN7基因篩查后未找到突變位點(diǎn)的先證者,再逐一篩查其余能導(dǎo)致骨硬化癥的致病基因;對所有擬診骨硬化癥合并腎小管酸中毒的先證者進(jìn)行CAII基因篩查,確定其突變位點(diǎn)及突變類型。對于臨床及基因均已確診的骨硬化癥先證者,對其相應(yīng)的突變蛋白進(jìn)行功能預(yù)測,并嘗試探討其基因型和臨床表型的相關(guān)性。方法:收集自2008年起北京協(xié)和醫(yī)院內(nèi)分泌科臨床診斷或擬診骨硬化癥的9個家系/(無家系)先證者。⑴分析9個骨硬化癥家系/(無家系)先證者的遺傳方式,臨床表現(xiàn)及影像學(xué)特征;⑵對9個骨硬化癥家系先證者/(無家系)先證者及其家系中的親屬進(jìn)行基因突變檢測;擬診常染色體顯性遺傳骨硬化癥的先證者針對CLCN7基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序;擬診常染色體隱性遺傳骨硬化癥合并腎小管酸中毒的先證者針對CAII基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序,如發(fā)現(xiàn)新的錯義突變則在50例無關(guān)健康人群中進(jìn)行驗證;⑶選取遺傳學(xué)已確診的錯義突變的骨硬化癥先證者,應(yīng)用蛋白預(yù)測軟件Polyphen-2進(jìn)行突變體蛋白功能預(yù)測,并探討其基因型和臨床表型的相關(guān)性;⑷對于遺傳學(xué)確診剪切位點(diǎn)突變的骨硬化癥先證者,進(jìn)行m RNA逆轉(zhuǎn)錄后RT-PCR分析,明確該剪切位點(diǎn)對于蛋白功能的影響。結(jié)果:1.本研究確診了6例ADOⅡ患者和1例IARO患者,基因檢測證實了8個CLCN7基因突變,其中2個(c.856CT,p.R286W;c.637CT,P.L213F)為已報道的突變;5個(c.1039GA,p.G347R;c.976AG,p.R326G;c.869CA,p.S290Y;c.1691TC,p.L564P;c.671TG,p.L224R)為新發(fā)的錯義突變,1個(p.L224R,p.K691FS)剪切位點(diǎn)的新發(fā)突變。該發(fā)現(xiàn)極大的擴(kuò)大了CLCN7基因突變數(shù)據(jù)庫。同時本研究總結(jié)并比較了CLCN7相關(guān)性的ADOⅡ和IARO患者分別在臨床特征和基因分型方面的異同點(diǎn),有助于提高臨床醫(yī)師對該種疾病的認(rèn)識。2.本研究報道了中國首例CAII相關(guān)性骨硬化癥,通過CAII基因檢測證實了CAII基因的2個新發(fā)突變(c.T381G,p.Y127X,c.350+2TC,IVS3+2TC),豐富了CAII基因突變數(shù)據(jù)庫。通過臨床觀察和分子生物學(xué)研究,提高了我們對于這種疾病的認(rèn)識。然而,對于蛋白截短長度更短的CAII基因的無義突變或剪切突變可引起的更為惡性的臨床表現(xiàn),我們僅限于推測,還存在一定的局限性。因此,后續(xù)的研究應(yīng)致力于收集更多的CAII相關(guān)性骨硬化癥患者的臨床資料去明確其基因型和表型的關(guān)系。結(jié)論:在本研究所納入臨床診斷或擬診骨硬化癥的患者中,最終確診了CLCN7相關(guān)性骨硬化癥ADOⅡ患者6例,CLCN7相關(guān)性骨硬化癥IARO患者1例以及ARO合并RTA患者2例。共發(fā)現(xiàn)致病基因突變10個,其中CLCN7基因突變8個,包含兩個已報道的錯義突變(p.R286W,p.L213F);7個新發(fā)突變,其中6個為新發(fā)錯義突變(p.L224R,p.S290Y,p.R326G,p.G347R,p.L564P),一個新發(fā)剪切位點(diǎn)的突變(p.K691FS)。CAII基因突變2個,均為新發(fā)突變,分別為c.350+2TC,IVS3+2TC剪切位點(diǎn)突變和c.T381C p.Y127X無義突變。將所有已證實的新發(fā)錯義突變經(jīng)過Ployphen2蛋白功能軟件預(yù)測,均顯示這些突變可嚴(yán)重?fù)p害蛋白編碼的正常功能。本研究在中國人群中證實了CLCN7和CAII基因是骨硬化癥的致病基因,并進(jìn)一步豐富了骨硬化癥相關(guān)致病基因數(shù)據(jù)庫。
【圖文】：

圖 2-1 家系 1 先證者：A 頭顱側(cè)位相：可見顱骨及顱底骨密度增厚(如箭頭所示)；B 胸腰椎側(cè)位相：椎骨骨密度增高，呈“夾心椎”樣(如箭頭所示)；C 髂骨正位片：骨密度不均勻增高，可見“骨中骨”現(xiàn)象(如箭頭所示)。2.1.1.2 家系 2先證者：馬 X，男性，7 歲，父母非近親結(jié)婚�；純阂驀�(yán)重的牙齒萌出異常行骨骼 X 線檢查發(fā)現(xiàn)特征性的骨硬化癥影像學(xué)表現(xiàn)，，診斷為“骨硬化癥”�；純耗壳吧砀� 116cm（低于同年齡同性別第二百分位數(shù)），體重 23kg。實驗室檢查：

2-2 家系 2 先證者：頜骨正位像：嚴(yán)重的牙齒萌出異常 X，男性，11 歲，父母非近親結(jié)婚。2013 年因身骨骼 X 線檢查后診斷為“骨硬化癥”�；颊叩谝惶ゲ辉��；颊叱鲅罆r間與同齡兒同，智力未見落后。年齡同性別第三百分位數(shù)），體重 34kg。實驗室檢
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R681

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本文編號：2529464