【摘要】：目的 糖尿病已經(jīng)成為人類健康的嚴(yán)重威脅。胰島移植在2000年Edmonton方案發(fā)布以后,已逐漸成為一項(xiàng)成熟的技術(shù),成為治療1型糖尿病和逆轉(zhuǎn)糖尿病慢性并發(fā)癥的有效方法。本實(shí)驗(yàn)旨在建立合適的人胰島移植純化方案,摸索純化液的配置方法,為開(kāi)展臨床胰島移植奠定基礎(chǔ)。 方法 獲取成人尸體胰腺,修剪后將胰腺剪成兩段,從胰管內(nèi)插管灌注消化液。待胰腺膨脹后剪成小塊,在Ricordi腔室系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)消化,收集的組織經(jīng)孵育后使用連續(xù)密度梯度法,分別用COBE2991細(xì)胞分離機(jī)和改良后的大瓶離心法純化。對(duì)純化后的胰島經(jīng)雙硫腙(DTZ)染色后計(jì)算胰島當(dāng)量(IEQ)、純度及胰島回收率。 結(jié)果 共實(shí)施九次胰島分離純化,前八次只使用COBE2991機(jī)進(jìn)行分離純化,純化結(jié)果不理想算作失敗。第九次嘗試使用改良后的大瓶離心法,其中一半胰腺消化產(chǎn)物使用COBE2991純化,另一半采用改良后的大瓶離心法純化。結(jié)果胰腺組織重78.8g,純化前胰島當(dāng)量為946000IEQ。使用COBE機(jī)純化后的胰島當(dāng)量為254600IEQ,純度64%；而使用改良后的大瓶離心法純化后的724300IEQ,純度90%；使用COBE機(jī)純化的每克胰腺胰島產(chǎn)量為3231IEQ/g,而改良后大瓶離心法純化后的9192IEQ/g。使用COBE機(jī)純化的胰島回收率為26.9%,而使用改良后大瓶離心法的胰島回收率為76.5%。 結(jié)論 已掌握使用COBE2991純化胰島的技術(shù)。使用改良后的大瓶離心法同樣可以獲得滿意的純化結(jié)果,且相比COBE2991細(xì)胞分離機(jī)更加經(jīng)濟(jì),有望成為未來(lái)胰島純化的主流技術(shù)。
【圖文】：

置入修剪盤，保存袋中倒入1000ml 酸納林格注射液，結(jié)扎主副胰管，，去除多余的脂肪血管及結(jié)締組織，將修剪完的胰腺稱重(圖1)。k 娭.彳。M. 一. ■ wmM圖1修剪完的胰腺2.3胰腺的灌注在胰頸部將胰腺剪成兩半，分別進(jìn)行胰管插管，并做好結(jié)扎；安裝胰腺灌注裝置及管路(圖2),先用少量HBSS溶液欲填充，確認(rèn)連接管路完好；加入4-8T：的膠原醇到修剪盤上，重新灌注滿管路系統(tǒng)，去除管路的氣泡；連接灌注管路到針頭上，開(kāi)啟灌注機(jī)，前4分鐘壓力在80mmHg,第4-10分鐘壓力設(shè)置180mmHg,溫度4-14°C(圖3)。使用50ml針筒再次灌注，使靠近胰管插管口的組織充分膨脹。再次修剪胰腺，去除多余的包膜。對(duì)修剪下的包膜稱重。將胰腺剪切到5-15塊1-1.5英寸長(zhǎng)的小塊組織。8
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R657.5

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2521668