【摘要】：目的探討周期性流體靜壓對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠骨膜細(xì)胞成骨分化和VEGF(vascular endothelial growth factor,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)表達(dá)的影響及其機(jī)制,以增加對(duì)骨折愈合機(jī)制的了解和為骨膜細(xì)胞在骨組織工程中的應(yīng)用提供研究基礎(chǔ),并可能為臨床上合理應(yīng)用力學(xué)刺激加速骨折愈合提供理論依據(jù)。方法體外分離培養(yǎng)大鼠骨膜細(xì)胞,2-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。骨膜細(xì)胞體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)2周,ALP(alkaline phosphatase,堿性磷酸酶)染色和茜素紅染色鑒定骨膜細(xì)胞成骨潛力。給予大鼠骨膜細(xì)胞周期性流體靜壓(0-13kpa,0.5Hz)刺激,對(duì)照組不予加壓刺激。SP600125、SB203580和PD98059預(yù)處理細(xì)胞后給予加壓刺激以探討MAPK(mitogen-activated protein kinase,絲裂原激活的蛋白激酶)信號(hào)通路在加壓刺激對(duì)骨膜細(xì)胞的影響中的作用。在加壓不同時(shí)間(6、12、24h)通過(guò)CCK-8(cell Counting Kit-8)法檢測(cè)細(xì)胞存活率,堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)堿性磷酸酶活性變化,RT-PCR(real time quantitative polymerase chain reaction,實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng))檢測(cè)成骨相關(guān)基因(runx2、ALP、I型膠原、骨鈣素)和VEGF基因表達(dá)情況,Western blot檢測(cè)p38、ERK1/2(extracellular regulated protein kinases,細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶)和JNK(c-Jun amino terminal kinase,c-Jun氨基末端激酶)蛋白表達(dá)及其磷酸化水平。結(jié)果周期性流體靜壓刺激6h,細(xì)胞增殖無(wú)明顯變化,隨著加壓時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞增殖受到抑制。周期性流體靜壓刺激骨膜細(xì)胞,堿性磷酸酶活性明顯升高,呈時(shí)間依賴性。骨膜細(xì)胞成骨相關(guān)基因(runx2、ALP、骨鈣素、I型膠原)和VEGF基因表達(dá)也明顯升高。SP600125和PD98059可以部分抑制周期性流體靜壓引起的骨膜細(xì)胞ALP活性升高反應(yīng)。SP600125可以完全抑制壓力誘導(dǎo)的骨膜細(xì)胞成骨相關(guān)基因(runx2、骨鈣素、I型膠原)及VEGF基因的表達(dá),而SB203580則對(duì)此沒(méi)有明顯作用。PD98059可抑制部分壓力刺激引起的骨膜細(xì)胞成骨相關(guān)基因表達(dá),但對(duì)壓力刺激引起的骨膜細(xì)胞VEGF的表達(dá)沒(méi)有作用。結(jié)論適當(dāng)強(qiáng)度周期性流體靜壓可以通過(guò)激活JNK和ERK1/2信號(hào)通路促進(jìn)大鼠骨膜細(xì)胞成骨分化,并可通過(guò)激活JNK信號(hào)通路介導(dǎo)VEGF表達(dá),而p38信號(hào)通路沒(méi)有參與這種壓力對(duì)骨膜細(xì)胞的作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R683

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本文編號(hào)：2521600