【摘要】：目的：周圍神經(jīng)損傷是臨床常見病,常常導致嚴重的神經(jīng)支配區(qū)域功能損害。本實驗應(yīng)用過表達的CDNF在大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型中,探討聯(lián)合應(yīng)用人工神經(jīng)導管和CDNF基因治療對周圍神經(jīng)再生的作用。方法：在本研究中,我們將神經(jīng)導管的導向作用與重組CDNF慢病毒載體聯(lián)合起來治療坐骨神經(jīng)損傷。首先,構(gòu)建表達重組CDNF'慢病毒載體,應(yīng)用大鼠神經(jīng)坐骨神經(jīng)缺損模型,觀察神經(jīng)導管和CDNF對坐骨神經(jīng)再生和功能恢復的影響。(1)術(shù)后2、4、6、8周時間點,檢測大鼠足跡并計算坐骨神經(jīng)功能指數(shù)。(2)術(shù)后4周,取坐骨神經(jīng)再生段遠端1cm的坐骨神經(jīng),液氮保存后Western blot檢測各組CDNF蛋白的表達水平。(3)在術(shù)后4、8周時間點,取大鼠再生坐骨神經(jīng)和正常神經(jīng)做HE染色,觀察神經(jīng)組織學大致形態(tài)。應(yīng)用免疫組化技術(shù)染色S100蛋白以顯示髓鞘,染色NF200蛋白以顯示軸突。(4)在術(shù)后8周時間點,掃描電鏡觀察再生的神經(jīng),對再生髓鞘的厚度進行測量分析。(5)在術(shù)后4、8周,取手術(shù)側(cè)腓腸肌稱重分析,評估坐骨神經(jīng)恢復水平。結(jié)果：(1)在術(shù)后4周時間點,重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組損傷神經(jīng)遠端高表達CDNF蛋白。(2)在術(shù)后4周和8周時間點,HE常規(guī)染色與S100和NF200免疫組化顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組再生的神經(jīng)在形態(tài)學上表現(xiàn)出更規(guī)則有序的形態(tài)和良好的軸突再生。(3)透射電鏡下重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組在8周時神經(jīng)的超微結(jié)構(gòu)與正常神經(jīng)更為類似,再生髓鞘厚度顯著優(yōu)于對照組。(4)腓腸肌濕重測量顯示重組CDNF慢病毒載體應(yīng)用組明顯減輕肌肉萎縮。大鼠坐骨神經(jīng)功能指數(shù)分析結(jié)果顯示重組CDNF'慢病毒載體應(yīng)用組,大鼠后肢功能恢復明顯優(yōu)于對照組。結(jié)論：實驗證實CDNF'慢病毒載體的基因治療在神經(jīng)損傷段提供一個穩(wěn)定持續(xù)的CDNF表達,再生的坐骨神經(jīng)在形態(tài)學和功能學上表現(xiàn)出良好的修復,明顯促進坐骨神經(jīng)的再生,為臨床治療周圍神經(jīng)損傷提供一種新的治療策略。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R651.3

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本文編號：2516400