【摘要】：目的:體外研究已證實(shí)低氧培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADMSCs)可以提高它的的生存能力以及向肌腱細(xì)胞分化的潛能,本研究通過(guò)對(duì)ADMSCs經(jīng)低氧預(yù)培養(yǎng)后再?gòu)?fù)合小腸粘膜下層(SIS)修復(fù)大鼠跟腱缺損的體內(nèi)研究探討ADMSCs復(fù)合SIS構(gòu)建組織工程肌腱修復(fù)肌腱缺損的可能性,并進(jìn)一步探討低氧是否能促進(jìn)ADMSCs復(fù)合SIS治療肌腱缺損的治療效果,為治療肌腱損傷提供一種新的理論依據(jù)。方法:從Sprague-Dawley大鼠的脂肪組織分離、提取ADMSCs,并對(duì)其進(jìn)行純化、傳代培養(yǎng),將第3代ADMSCs采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ADMSCs表面標(biāo)志物的表達(dá)。將第3代ADMSCs分成兩組,分別置于常氧(20%02)與低氧(2%02)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天,然后采用CM-DiI標(biāo)記兩組細(xì)胞,再將標(biāo)記的ADMSCs復(fù)合SIS后在常氧條件下培養(yǎng)48小時(shí)。選取50只(250—300g)雄性SD大鼠,隨機(jī)選取30只分成A、B、C三組,每組10只,剩余20只大鼠左側(cè)跟腱記為D租,右側(cè)跟腱記為E組。將A組作為假手術(shù)組,將B、C、D、E四組大鼠雙側(cè)跟腱的外側(cè)束與后束去掉約0.5cm,作為大鼠跟腱缺損的模型,其中將B組作為自體肌腱移植組、C組作為單純SIS組、D組作為常氧ADMSCs復(fù)合SIS組、E組作為低氧ADMSCs復(fù)合SIS組,采用改良的Kessler縫合法將自體離斷的跟腱或SIS縫在缺損的跟腱上,然后將所有實(shí)驗(yàn)組雙腿行石膏外固定,四周后觀察移植段的大體情況,并進(jìn)行HE、masson染色、免疫組織化學(xué)檢查、圖像分析以及生物力學(xué)測(cè)試。結(jié)果:(1)術(shù)后4周移植段he染色結(jié)果顯示:a組可見(jiàn)肌腱細(xì)胞稀少且呈細(xì)小長(zhǎng)梭形,肌腱膠原纖維呈致密波浪狀并朝一個(gè)方向排列;b組可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞,細(xì)胞外基質(zhì)排列順序紊亂;c組、d組以及e組的sis上均有長(zhǎng)梭形細(xì)胞沿著細(xì)胞外基質(zhì)朝一個(gè)方向有規(guī)律的排列,e組中長(zhǎng)梭形細(xì)胞數(shù)的比例高于c、d兩組,但d組的長(zhǎng)梭形細(xì)胞數(shù)卻高于c組,c、d、e三組中,e組的細(xì)胞外基質(zhì)最多,但d組的細(xì)胞外基質(zhì)卻多于c組。(2)4周后masson染色顯示:a組膠原纖維呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色,細(xì)胞核呈黑色,可見(jiàn)少量的梭形細(xì)胞沿膠原纖維方向排列;b組可見(jiàn)大量沿膠原纖維排列的梭形細(xì)胞,但膠原纖維呈無(wú)規(guī)則排列;c組、d組以及e組均有不同數(shù)量的長(zhǎng)梭形細(xì)胞沿著膠原纖維朝一個(gè)方向有規(guī)律的排列,e組膠原纖維的沉積量最大、且排列順序最整齊,但d組膠原纖維的沉積量以及排列順序要優(yōu)于c組。(3)d組與e組移植段免疫組織化學(xué)檢查顯示:d組與e組的長(zhǎng)梭形細(xì)胞和橢圓形細(xì)胞中均有大量的腱調(diào)蛋白(tnmd)蛋白以及mkx(mohawkhomeobox)蛋白表達(dá),通過(guò)對(duì)mkx蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分析,e組中表達(dá)mkx陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)要明顯高于d組(p0.05)。以上結(jié)果表明e組移植段比d組更易塑造成肌腱樣組織。(4)d組與e組移植段admscs檢測(cè)與mkx免疫熒光化學(xué)染色檢查顯示:d組與e組均有大量的admscs存在,并且e組表達(dá)mkx蛋白陽(yáng)性admscs的數(shù)量比例要高于d組(p0.05)。(5)4周后生物力學(xué)測(cè)試顯示:e組破壞力(32.34±2.71)n要高于c組(20.33±1.47)n及d組(27.78±2.11)n(p0.05),e組最接近b組(37.62±1.54)n(p0.05),而d組高于c組(p0.05)。結(jié)論:(1)admscs復(fù)合sis構(gòu)建組織工程肌腱修復(fù)肌腱缺損的治療效果要優(yōu)于單純利用SIS修復(fù)。(2)低氧可以促進(jìn)ADMSCs復(fù)合SIS治療肌腱缺損的治療效果。(3)附在SIS上的ADMSCs可能分化成了肌腱樣細(xì)胞,并且低氧對(duì)ADMSCs向肌腱樣細(xì)胞分化可能起到了促進(jìn)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R687.2

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本文編號(hào)：2446217