【摘要】：研究目的:探討移植人脂肪源干細(xì)胞能否促進(jìn)前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨界面的愈合。研究方法:將48只體重2.5-3.Okg的雌性新西蘭大白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組各24只。取同側(cè)半腱肌作為供體肌腱,建立單側(cè)下肢前交叉韌帶重建動(dòng)物模型,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照分別在脛骨和股骨隧道中注射hASCs和等量的生理鹽水。分別在術(shù)后2、4和8周取材,收集脛骨-移植韌帶-股骨標(biāo)本行組織學(xué)和生物力學(xué)檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,運(yùn)用SPSS20.0軟件,采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)檢測(cè)各數(shù)據(jù)間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05表示為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果:1.人脂肪源干細(xì)胞的鑒定流式細(xì)胞結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞表面抗體CD90(99.5%),,CD51(96.8%),CD105(91.1%)為陽(yáng)性表達(dá);CD34(10.6%),CD45(10.7%),CD49e(12.2%)為陰性表達(dá)。2.ALP染色結(jié)果堿性磷酸酶染色結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性染色較對(duì)照組陽(yáng)性染色明顯,通過(guò)軟件Image-pro plus6.0對(duì)染色圖片進(jìn)行半定量分析,半定量結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組單位面積上累計(jì)光密度值(IOD/Area)較對(duì)照組顯著增高且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.0257)。3.qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)成骨基因的表達(dá)與對(duì)照組相比,OCN基因表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,OPN基因表達(dá)是對(duì)照組的6.8倍(P=0.018),RUNX2基因表達(dá)是對(duì)照組的2.6倍(P=0.015),ALP基因表達(dá)是對(duì)照3.1倍(P=0.019),Collagen-1基因表達(dá)是對(duì)照組的4.1倍(P=0.043)且都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.組織學(xué)分析4.1 HE染色結(jié)果HE染色結(jié)果顯示對(duì)照組術(shù)后2周腱骨界面主要以炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為主,4周時(shí)減少,術(shù)后8周時(shí)在腱骨界面形成以纖維結(jié)締組織為主的間接止點(diǎn)結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周在腱骨界面可見(jiàn)少量纖維軟骨細(xì)胞和骨細(xì)胞,術(shù)后8周時(shí)有新生骨形成,在腱骨界面處形成直結(jié)止點(diǎn)。4.2 Masson' s trichrome 染色結(jié)果Masson' s trichrome染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后2周時(shí)主要以炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為主。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周在腱骨界面處可見(jiàn)纖維軟骨細(xì)胞及纖維結(jié)締組織形成,術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組腱骨界面處可有新生骨及致密結(jié)締組織形成而對(duì)照組無(wú)新生骨形成。5.生物力學(xué)分析從生物力學(xué)數(shù)據(jù)分析可知,術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組最大載荷(21.02±8.30 N vs 12.36±7.67N,p=0.09)大于空白對(duì)照組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后4周(87.52±10.29N vs 14.76±4.1ON,P0.01)、8 周(126.31±12.85 N vs 47.0±12.81N,P0.01)實(shí)驗(yàn)組最大載荷均大于空白對(duì)照組且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后 2 周(9.76±5.07N/mm vs 7.85 ± 4.11N/mm,P=0.49)、8 周(37.18 ±5.62N/mm vs 30.28±23.86 N/mmm,P=0.51)實(shí)驗(yàn)組移植肌腱剛度大于空白對(duì)照組移植肌腱的的剛度,但都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在術(shù)后4周時(shí)(27.80±7.24N/mmm vs 8.98±4.12,P0.01),實(shí)驗(yàn)組移植肌腱的剛度大于空白對(duì)照組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。研究結(jié)論1.hASCs在體外成骨誘導(dǎo)環(huán)境下可向成骨方向分化,具有一定的成骨能力2.組織學(xué)染色結(jié)果顯示人脂肪源干細(xì)胞能促進(jìn)腱骨界面的骨化,促進(jìn)腱骨界面向直接止點(diǎn)轉(zhuǎn)化3.在腱骨界面移植經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化的人脂肪源干細(xì)胞能增強(qiáng)腱骨界面的生物力學(xué)性能,具有一定能的臨床應(yīng)用潛能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R687.4

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本文編號(hào)：2444385