【摘要】：第一部分P2X3受體選擇性抑制劑延緩小鼠嗎啡耐受的發(fā)生目的1、觀察P2X3受體選擇性抑制劑A-317491對小鼠嗎啡耐受過程的影響;2、觀察P2X3受體選擇性抑制劑A-317491對耐受小鼠納洛酮戒斷癥狀的影響;3、觀察P2X3受體選擇性抑制劑A-317491逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受的作用。方法本實(shí)驗(yàn)小鼠共分為四組:1、嗎啡組(M組,n=14),每天兩次腹腔給予10 mg/kg嗎啡,連續(xù)七天;第七天給藥2小時(shí)后每只小鼠腹腔注射5mg/kg的納洛酮進(jìn)行戒斷實(shí)驗(yàn)(n=7);第八天進(jìn)行單劑量A-317491逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受的實(shí)驗(yàn)(n=7);2、抑制劑與嗎啡組(AM組,n=14),每天兩次腹腔給予10mg/kg A-317491,30分鐘后腹腔給予10 mg/kg嗎啡,連續(xù)七天;第七天給藥2小時(shí)后每只小鼠腹腔注射5mg/kg的納洛酮進(jìn)行戒斷實(shí)驗(yàn)(n=7);第八天進(jìn)行單劑量A-317491逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受的實(shí)驗(yàn)(n=7);3、單純抑制劑組(A組,n=14)每天兩次腹腔給予10mg/kg A-317491,連續(xù)七天;第七天給藥2小時(shí)后每只小鼠腹腔注射5mg/kg的納洛酮進(jìn)行戒斷實(shí)驗(yàn)(n=7);第八天進(jìn)行單劑量A-317491逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受的實(shí)驗(yàn)(n=7);4、生理鹽水組(S組,n=14),每天腹腔給予生理鹽水,連續(xù)七天;第七天給藥2小時(shí)后每只小鼠腹腔注射5mg/kg的納洛酮進(jìn)行戒斷實(shí)驗(yàn)(n=7);第八天進(jìn)行單劑量A-317491逆轉(zhuǎn)嗎啡耐受的實(shí)驗(yàn)(n=7);每天的兩次給藥時(shí)間間隔12h,總的給藥容積為1ml,給藥天數(shù)為七天。每次給藥30min后,對每只小鼠用纖維絲及甩尾法測定痛閾的變化,以此對小鼠嗎啡耐受的情況進(jìn)行判斷。結(jié)果1、小鼠的行為學(xué)結(jié)果顯示,給予嗎啡第1天的鎮(zhèn)痛效能最大,從第3天開始鎮(zhèn)痛效應(yīng)逐漸降低,連續(xù)使用7天后嗎啡失去鎮(zhèn)痛作用,而同時(shí)給予P2X3受體特異性抑制劑A-317491可以明顯延緩該耐受過程的發(fā)生;2、納洛酮戒斷實(shí)驗(yàn)顯示,與對照組相比,給予P2X3受體特異性抑制劑A-317491可以顯著減輕小鼠對嗎啡的依賴癥狀;3、第八天給予P2X3受體特異性抑制劑A-317491可部分恢復(fù)已耐受小鼠嗎啡的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。結(jié)論P(yáng)2X3受體參與了小鼠嗎啡耐受的發(fā)生,給予P2X3受體特異性抑制劑A-317491可以延緩小鼠嗎啡耐受的發(fā)生;減輕其納洛酮戒斷癥狀;對于已發(fā)生耐受的小鼠,A-317491單次給藥可部分恢復(fù)嗎啡的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。第二部分P2X3受體選擇性抑制劑對大鼠鞘內(nèi)嗎啡耐受發(fā)生情況及DRG中P2X3受體表達(dá)的影響及其可能的機(jī)制目的1、觀察鞘內(nèi)給予不同天數(shù)嗎啡對大鼠DRG中P2X3受體以及PKCε表達(dá)的影響;2、觀察P2X3受體選擇性抑制劑A-317491對大鼠鞘內(nèi)嗎啡耐受發(fā)生情況以及DRG中P2X3受體以及PKCε表達(dá)的影響;3、研究P2X3受體選擇性抑制劑A-317491影響大鼠鞘內(nèi)嗎啡耐受的可能機(jī)制。方法鞘內(nèi)置管成功的SD大鼠隨機(jī)分為8組,每組7只:1、M3,M5,M7組,分別每天單次鞘內(nèi)給15μg/10μl嗎啡,繼而用10μl生理鹽水沖管,分別連續(xù)3、5、7天;2、M+A組,A-317491加嗎啡七天,每天單次鞘內(nèi)給15μg/10μl A-317491,30min后給15μg/10μl嗎啡,每次給藥后用10μl生理鹽水沖管;3、A組,A-317491七天,每天單次鞘內(nèi)給15μg/10μl A-317491,繼而用10μl生理鹽水沖管;4、M+epsilon-V1-2組,epsilon-V1-2加嗎啡七天,每天單次鞘內(nèi)給10μg/10μl epsilon-V1-2,30min后給15μg/10μl嗎啡,每次給藥后用10μl生理鹽水沖管;5、Epsilon-V1-2組,epsilon-V1-2七天,每天單次鞘內(nèi)給10μg/10μl epsilon-V1-2,繼而用10μl生理鹽水沖管;6、S組,每天單次鞘內(nèi)給20μl生理鹽水,連續(xù)7天。每天最后一次給藥后30min檢測大鼠后肢縮爪閾值,以及甩尾時(shí)間,以評估嗎啡耐受情況。于給藥后第8天測定痛閾后將大鼠處死,取L3~5節(jié)段背根神經(jīng)節(jié)(DRG)進(jìn)行蛋白印記和免疫熒光化學(xué)染色。結(jié)果1、鞘內(nèi)給予P2X3受體特異性抑制劑A-317491以及PKCε受體抑制劑ε-V1-2可明顯延緩大鼠嗎啡耐受的發(fā)展;2、鞘內(nèi)給予嗎啡可致大鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)中P2X3蛋白表達(dá)增加,而A-317491可以降低這種表達(dá)的增加;3、慢性鞘內(nèi)嗎啡處理可使大鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)中PKCε的表達(dá)增加,而給予A-317491后可以抑制這種表達(dá)的增加。結(jié)論鞘內(nèi)慢性嗎啡處理可激活大鼠DRG神經(jīng)元中的P2X3受體的表達(dá),而選擇性抑制P2X3受體可一定程度上抑制嗎啡耐受的發(fā)生,該過程可能是通過降低PKCε的活性而達(dá)到的。
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【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 程瑞動(dòng);屠文展;王萬勝;鄒恩苗;操芬;程博;王杰枝;姜永霞;蔣松鶴;;Effect of Electroacupuncture on the Pathomorphology of the Sciatic Nerve and the Sensitization of P2X_3 Receptors in the Dorsal Root Ganglion in Rats with Chronic Constrictive Injury[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2013年05期

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本文編號：2415618