【摘要】：目的表皮生長因子(Epidermal Growth Factor,EGF)具有加速皮膚角質(zhì)細(xì)胞的遷移、分化和增殖作用,現(xiàn)已廣泛的用于各種化妝品中。然而,由于皮膚的屏障作用,化妝品中的EGF幾乎不能經(jīng)皮滲透進(jìn)入皮膚。本文旨在研究通過微針技術(shù),提高EGF透皮吸收量,從而發(fā)揮生理和藥理作用,同時也為其他大分子藥物經(jīng)皮滲透提供實(shí)用方法。材料和方法1、剃除SD大鼠背部毛發(fā)后,肉眼觀察剃毛后皮膚出血情況及皮下組織修剪前后情況。取下SD大鼠皮膚后行HE染色,組織學(xué)觀察皮下組織修剪前后皮膚角質(zhì)層完整性和修剪層次和微針針刺后的針刺深度。2、采用改良的Franz擴(kuò)散池進(jìn)行大鼠離體皮膚滲透試驗(yàn),分為5組:生理鹽水組、10.0mg/L rh EGF組、微針+1.0mg/L rh EGF組、微針+10.0mg/L rh EGF組、微針+20.0mg/L rh EGF組。用rh EGF ELISA KIT法測定接受液中EGF的含量,分別計算出在涂藥后的0.5h、1h、2h、4h、6h和8h的藥物累積滲透量和累積滲透率,確認(rèn)使用微針后rh EGF獲得了良好的滲透效果。3、SD大鼠處理操作:取3只體重約200±30g的大鼠,備皮后飼養(yǎng)24h,腹腔注射水合氯醛(0.003m L·g-1)麻醉。于大鼠脊柱兩側(cè)對稱部位畫直徑約1.50cm的圓圈,左右各三個,使用微針陣列以約5N壓力(與人手指按壓力度相當(dāng))刺入皮膚。4、龍膽紫染色、大體和組織學(xué)觀察:SD大鼠按操作3處理后,用龍膽紫染色,拍攝照相,肉眼觀察并記錄皮膚有無紅斑及水腫出現(xiàn)以及角質(zhì)層恢復(fù)情況。切取全層皮膚行HE染色,觀察組織學(xué)變化。5、鈣黃綠素染色實(shí)驗(yàn):大鼠按操作3處理后,用鈣黃綠素棉球覆蓋,避光染色10min,取開棉球,用鹽水和酒精棉球交替擦拭各2遍,取全層皮膚稍微修剪皮下組織后置于載玻片,立即在熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長490nm,發(fā)射波長515nm,統(tǒng)計光斑數(shù),獲取熒光圖像。6、取10只已備皮的SD大鼠,體重約200±30g,分2組,每組5只,按操作3處理。待完全麻醉后進(jìn)行標(biāo)記,第一組為10.0mg/L rh EGF組,左側(cè)由頭側(cè)向尾側(cè)標(biāo)記為0.5h、1h、2h,右側(cè)從頭到尾標(biāo)記為4h、6h、8h,直接皮膚給藥至指定時間點(diǎn)后切取皮膚全層及皮下肉膜均漿。第二組為微針+10.0mg/L rh EGF組,左側(cè)由頭側(cè)向尾側(cè)標(biāo)記為0.5h、1h、2h,右側(cè)從頭到尾標(biāo)記為4h、6h、8h。微針5N壓力后,立即外用10.0mg/L rh EGF直至指定時間,取涂抹部位皮膚全層,將全層皮膚和皮下肉膜層分開,分別勻漿,采用rh EGF ELISA KIT測定各組皮膚及皮下肉膜rh EGF濃度。7、皮膚和肉膜中EGF含量分別用x±s表示。采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。多個實(shí)驗(yàn)組樣本均數(shù)兩兩之間的全面比較用SNK-q檢驗(yàn)(n=5),P0.05為差異有顯著性。結(jié)果1、大鼠脊柱兩側(cè)毛發(fā)剃除干凈,未見傷痕及出血點(diǎn),飼養(yǎng)24h后,角質(zhì)層完好無損,皮膚屏障結(jié)構(gòu)健全。修剪后完整保留真皮層,未見皮下肌肉及脂肪組織。微針陣列針刺大鼠皮膚后,角質(zhì)層被破壞,微針刺入深度達(dá)真皮淺層。隨著時間推進(jìn),大鼠皮膚逐漸愈合,于12h~16h皮膚基本愈合,角質(zhì)層完整性恢復(fù)。2、微針+rh EGF組較rh EGF組獲得了良好的透皮效果。在給藥0.5h后生理鹽水組可測得微量EGF,說明鼠皮內(nèi)正常存在EGF。各時間點(diǎn)10.0mg/L rh EGF組、微針+1.0mg/L rh EGF組、微針+10.0mg/L rh EGF組、微針+20.0mg/L rh EGF組與生理鹽水組比較均可測得rh EGF透過,P0.05。生理鹽水組、10.0mg/L rh EGF組、微針+1.0mg/L rh EGF組、微針+10.0mg/L rh EGF組、微針+20.0mg/L rh EGF組隨著時間遷移rh EGF較上一時間點(diǎn)透過量增加,P0.05。微針+10.0mg/L rh EGF組較10.0mg/L rh EGF組獲得了良好的透皮效果,微針+10.0mg/L rh EGF組2h、4h、6h、8h透過量分別為10.0mg/L rh EGF組的9.485、19.989、12.768、6.994倍(P0.05)。微針+10.0mg/L+rh EGF組、微針+20.0mg/L rh EGF組在2~4h單位時間透皮量和單位時間透皮率達(dá)到峰值,各組累積透皮量和累積透皮率隨時間延長緩慢增加。各組8h累積透皮率小于均1%。3、微針針刺后8h仍可見有龍膽紫殘留于角質(zhì)層上,16h后基本不見龍膽紫殘留。推測微孔愈合時間在8~16h。4、鈣黃綠素染色:微針處理皮膚微孔愈合過程中,鈣黃綠素透過量減少,熒光光斑變小,12h時微弱可見,16h觀察不到熒光光斑。5、創(chuàng)傷愈合組織學(xué)觀察:滾輪微針處理后皮膚屏障破壞,深達(dá)真皮淺層,隨著時間的延長,微孔收縮,尺寸變小。到16h,微孔被增生的表皮細(xì)胞覆蓋,皮膚屏障結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)。6、微針+10.0mg/L組及10.0mg/L組在2h、4h、6h、8h皮膚組織中EGF含量較正常皮膚均增加(P0.05)。微針+10.0mg/L組及10.0mg/L組在4h后皮膚EGF含量均達(dá)到峰值,為正常皮膚的1.92倍(P0.05)。7、10.0mg/L rh EGF組、微針+10.0mg/L rh EGF組大部分時間點(diǎn)肉膜EGF含量高于正常皮膚(P0.05)。微針+10.0mg/L rh EGF組肉膜各個時間點(diǎn)EGF含量均高于10.0mg/L rh EGF組肉膜(P0.05)。結(jié)論1、微針+rh EGF組較rh EGF組和生理鹽水組獲得了良好的透皮效果,但8h累積滲透量仍小于1%。2、微針?biāo)挛?chuàng)傷在12~16h內(nèi)愈合,皮膚屏障功能恢復(fù)。3、微針+10.0mg/L組及10.0mg/L組在2h、4h、6h、8h皮膚組織中EGF含量較正常皮膚增加,且達(dá)到了發(fā)揮EGF生理效用的濃度。
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【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R62

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1 余yN;微針導(dǎo)入技術(shù)促進(jìn)重組人表皮生長因子透皮吸收[D];蘭州大學(xué);2017年

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本文編號：2396404