【摘要】：目的:尋找移植靜脈重塑中PCNA的配體蛋白。方法:我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)通過免疫組化和Western-blotting等發(fā)現(xiàn)PCNA的表達(dá)在術(shù)后1d呈最低值,術(shù)后7d呈峰值。證實(shí)了移植靜脈橋在術(shù)后1d凋亡顯著,在術(shù)后7d增殖明顯,因此我們選擇術(shù)后1d、術(shù)后7d和正常靜脈組,建立動(dòng)物模型,在術(shù)前、術(shù)后1d和術(shù)后7d取出標(biāo)本,通過PCNA抗體免疫沉淀,獲得生理?xiàng)l件下與PCNA相互作用的蛋白質(zhì),再用質(zhì)譜定量分析技術(shù)對(duì)PCNA的配體蛋白進(jìn)行差異分析,尋找特異性靶蛋白,并進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:通過質(zhì)譜分析共鑒定蛋白質(zhì)組數(shù)1238個(gè),肽段數(shù)5840個(gè)。蛋白質(zhì)顯著性分析發(fā)現(xiàn)與正常靜脈組相比術(shù)后1d和術(shù)后7d差異蛋白數(shù)分別為30個(gè)和37個(gè),術(shù)后1d和術(shù)后7d差異蛋白數(shù)為29個(gè)。術(shù)后1d和術(shù)后7d差異表達(dá)蛋白GO富集分析前15個(gè)注釋中,氮代謝合成、細(xì)胞刺激反應(yīng)富集度較高。KEGG富集度分析術(shù)后1d和術(shù)后7d中14-3-3蛋白主要集中在PI3K-AKT信號(hào)通路、Focal adhesion通路。我們通過Western-blotting驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),術(shù)后1d 14-3-3γ表達(dá)增加,術(shù)后7d 14-3-3γ表達(dá)減少,但高于正常對(duì)照組,14-3-3γ在術(shù)后1d表達(dá)明顯增加,與急性損傷早期細(xì)胞修復(fù)有關(guān),術(shù)后7d表達(dá)下降,與細(xì)胞急性損傷逐漸恢復(fù),并進(jìn)入增殖期有關(guān)。免疫熒光實(shí)驗(yàn)示14-3-3γ在術(shù)后1d表達(dá)呈高峰,術(shù)后7d、14d表達(dá)下降,但高于正常對(duì)照組,術(shù)后28d表達(dá)呈低水平,低于正常對(duì)照組。我們的免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)了在術(shù)后1d急性損傷期14-3-3γ表達(dá)呈高峰,隨著損傷的消退,移植靜脈逐漸適應(yīng)了動(dòng)脈環(huán)境,14-3-3γ表達(dá)逐漸下降。結(jié)論:14-3-3γ是移植靜脈重塑中PCNA配體蛋白,在移植術(shù)后急性期表達(dá)顯著。
[Abstract]:Objective: to search for the ligand protein of PCNA in vein graft remodeling. Methods: we found that the expression of PCNA was the lowest on the 1st day after operation and the peak at 7 days after operation by immunohistochemistry and Western-blotting. It was proved that the graft was apoptotic at 1 day after operation and proliferated obviously at 7 days after operation. So we chose the group of vein grafts 1 day, 7 days after operation and normal vein group to establish the animal model. The specimens were taken out before operation, 1 day after operation and 7 days after operation. The proteins interacting with PCNA under physiological conditions were obtained by immunoprecipitation of PCNA antibody. The ligands of PCNA were analyzed by mass spectrometry to find specific target proteins. Results: 1238 proteins and 5840 peptides were identified by mass spectrometry. Compared with the normal venous group, the number of differential proteins was 30 and 37 on the 1st day and 7th day, and 29 on the 1st day and the 7th day after operation respectively. In the first 15 notes of GO enrichment analysis of differential expression protein 1 day after operation and 7 days after operation, nitrogen metabolism and cell stimulating reaction enrichment were higher. 14-3-3 protein was mainly located in PI3K-AKT signal pathway 1 day after operation and 7 days after operation by KEGG enrichment analysis. Focal adhesion pathway. We found that the expression of 14-3-3 緯 increased on the 1st day after operation and decreased on the 7th day after operation, but it was higher than that in the normal control group. The expression of 14-3-3 緯 increased significantly on the 1st day after operation, which was related to the early cell repair after acute injury. The decrease of expression at 7 days after operation was related to the recovery of acute cell injury and the entry of proliferative phase. Immunofluorescence assay showed that the expression of 14-3-3 緯 peaked on the 1st day after operation, decreased on the 7th day after operation, but was higher than that in the normal control group, and was lower than that in the normal control group on the 28th day after operation, and was lower than that in the normal control group. Our immunofluorescence assay confirmed the peak expression of 14-3-3 緯 on the 1st day after acute injury. With the extinction of the injury, the vein grafts gradually adapted to the arterial environment and the expression of 14-3-3 緯 decreased gradually. Conclusion: 14-3-3 緯 is a PCNA ligand protein in vein remodeling.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R654.2

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本文編號(hào)：2393709