發(fā)布時(shí)間：2018-12-20 06:09

【摘要】：目的:研究通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染RNAi技術(shù)介導(dǎo)的Muscle RING finger 1(Mu RF1)基因阻斷或下調(diào)來(lái)延緩大鼠喪失神經(jīng)后出現(xiàn)的骨骼肌萎縮的療效。為臨床上因失去神經(jīng)支配導(dǎo)致骨骼肌發(fā)生萎縮問(wèn)題的研究及治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:日齡為43-55天,選種屬為SD大鼠,稱空腹重量為192-202g的大鼠40只,隨機(jī)分為注射50μL重組慢病毒載Lenti.GFP-Mu RF1(即注射干擾基因組)實(shí)驗(yàn)組共計(jì)20只,和注射Lenti.GFP溶液50μL(即注射空載體組)對(duì)照組20只。切斷并翻轉(zhuǎn)縫合大鼠左側(cè)髖部處的坐骨神經(jīng),制造左趾長(zhǎng)伸肌喪失神經(jīng)支配的模型。造模型后按組別于失神經(jīng)趾長(zhǎng)伸肌注射干擾基因與空載體量均為50μL,注射后滿一周與三周時(shí),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩組大鼠分別取6只,完整顯露起止點(diǎn)后切除左側(cè)趾長(zhǎng)伸肌,于熒光顯微鏡下觀察綠色熒光信號(hào)。分別于二百倍顯微鏡與2萬(wàn)倍電鏡觀察肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),檢測(cè)肌肉總蛋白含量,測(cè)肌肉濕重維持率,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Mu RF1基因,比較不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠趾長(zhǎng)伸肌肌細(xì)胞橫截面積。結(jié)果:轉(zhuǎn)染后1和3周,兩組趾長(zhǎng)伸肌中均可觀察到大量GFP熒光信號(hào)。轉(zhuǎn)染后1周實(shí)驗(yàn)組的肌濕重維持率、肌細(xì)胞橫截面積、趾長(zhǎng)伸肌肌肉總蛋白含量分別為(90.87±4.56)%、(943.53±24.27)μ3『，

本文編號(hào)：2387547