發(fā)布時(shí)間：2018-12-09 07:56

【摘要】：目的:本次實(shí)驗(yàn)旨在觀察丙泊酚對(duì)正常脾源性樹突狀細(xì)胞和脂多糖激活后樹突狀細(xì)胞的分化及表面分子MHC II和CD80的影響,同時(shí)從脂多糖(LPS)-Toll樣受體4(TLR4)通路和神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)(β1腎上腺素能受體通路)兩個(gè)角度初步探索其可能存在的相關(guān)受體機(jī)制,進(jìn)一步明確丙泊酚的免疫調(diào)節(jié)特性和抗炎作用,從而為丙泊酚在危重病人中的合理應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論參考。方法:本次實(shí)驗(yàn)的研究靶點(diǎn)是小鼠脾源性的樹突狀細(xì)胞,本次實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用的檢測(cè)技術(shù)是流式細(xì)胞術(shù)。具體方法如下:1本次實(shí)驗(yàn)使用的動(dòng)物是6到8周的雄性BALB/c小鼠,體重20±1克。采用頸椎離斷法將小鼠處死,當(dāng)即無菌下取出小鼠脾臟,采用小鼠淋巴細(xì)胞分離液法制備小鼠脾源性單個(gè)核細(xì)胞懸液,之后采用磁珠分選的方法獲得小鼠脾源性樹突狀細(xì)胞。2實(shí)驗(yàn)分為四組,即正常對(duì)照組;丙泊酚刺激組(5,10和20ug/ml);脂多糖(1ug/ml)刺激組和1ug/ml脂多糖+丙泊酚(5,10和20ug/ml)刺激組。樹突狀細(xì)胞被均勻種植在48孔培養(yǎng)板中,實(shí)驗(yàn)分在兩個(gè)培養(yǎng)板同時(shí)進(jìn)行,其中一個(gè)培養(yǎng)板主要包含正常對(duì)照組,單純丙泊酚(5,10和20ug/ml)處理組以及脂多糖刺激組;另外一培養(yǎng)板主要進(jìn)行的是正常對(duì)照組,脂多糖組以及脂多糖刺激1小時(shí)之后加入不同濃度丙泊酚(5,10和20ug/ml)刺激組。按照以上分組的情況分別向細(xì)胞中加入對(duì)應(yīng)的刺激劑進(jìn)行干預(yù)。將培養(yǎng)板放入無菌CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。3經(jīng)過8小時(shí)之后,將細(xì)胞培養(yǎng)板中的細(xì)胞進(jìn)行分離和提取。之后主要通過流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)和分析,觀察比較不同組別之間小鼠脾源性樹突狀細(xì)胞的分化情況、共激分子CD80和表面分子MHC II類分子的表達(dá)水平以及相關(guān)受體(TLR4和β1腎上腺素能受體)的表達(dá)情況。結(jié)果:正如所參照的文獻(xiàn)中描述的一樣,小鼠脾源性樹突狀細(xì)胞在抗CD11c-APC和CD45RB-PE標(biāo)染后通過流式檢測(cè)分成了CD11chigh CD45R Blow樹突狀細(xì)胞,CD11clowCD45RBhigh樹突狀細(xì)胞和CD11clowCD45RBlow樹突狀細(xì)胞三個(gè)亞群。其中CD11chighCD45RBlow樹突狀細(xì)胞就是我們所熟知的傳統(tǒng)樹突狀細(xì)胞,而CD11clowCD45RBhigh樹突狀細(xì)胞則被稱為調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞,在免疫應(yīng)答中主要發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)控的作用。單純丙泊酚刺激組的結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比,臨床相關(guān)濃度的丙泊酚(5ug/ml和10ug/ml)對(duì)樹突狀細(xì)胞分化的影響不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)丙泊酚的劑量較大時(shí)(本次實(shí)驗(yàn)使用濃度為20ug/ml)明顯降低了CD11chighCD45RBlow樹突狀細(xì)胞的比例(P0.05)同時(shí)升高了CD11clowCD45RBhigh樹突狀細(xì)胞的比例(P0.05)。脂多糖刺激組與正常對(duì)照組相比,CD11chighCD45RBlow樹突狀細(xì)胞的比例升高(P0.05);而CD11chighCD45RBlow樹突狀細(xì)胞的比例變化沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脂多糖+丙泊酚刺激組與單純脂多糖(1ug/ml)刺激組相比,研究發(fā)現(xiàn)1ug/ml脂多糖+5ug/ml丙泊酚刺激對(duì)樹突狀細(xì)胞分化的影響較單純脂多糖刺激組而言差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;然而脂多糖刺激1小時(shí)后分別加入10ug/ml和20ug/ml的丙泊酚進(jìn)行干預(yù),二者均降低了CD11chighCD45RBlow樹突狀細(xì)胞的比例(P0.05),并且CD11c high CD45RBlow樹突狀細(xì)胞比例下降的程度在脂多糖(1ug/ml)+丙泊酚(10ug/ml)刺激組中不如在1ug/ml脂多糖+20ug/ml丙泊酚刺激組中明顯(P0.05)。此外,脂多糖刺激組與正常對(duì)照組相比,共激分子CD80,表面分子MHC II類分子,TLR4和β1腎上腺素能受體的表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。然而在脂多糖刺激1小時(shí)后加入不同濃度丙泊酚進(jìn)行刺激的組別中發(fā)現(xiàn),脂多糖(1ug/ml)+丙泊酚(5ug/ml)刺激組中共激分子CD80,表面分子MHC II類分子,TLR4和β1腎上腺素能受體的表達(dá)水平與單純脂多糖刺激組相比差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而在脂多糖(1ug/ml)+丙泊酚(10和20ug/ml)刺激組中這些指標(biāo)的表達(dá)水平明顯下降(P0.05),并且在1ug/ml脂多糖+20ug/ml丙泊酚刺激組中下降的更為顯著(P0.05)。結(jié)論:1 20ug/ml丙泊酚明顯抑制樹突狀細(xì)胞的正向免疫細(xì)胞分化,同時(shí)促進(jìn)負(fù)向免疫細(xì)胞分化,誘發(fā)免疫抑制。2 10ug/ml丙泊酚能夠?qū)怪嗵钦T發(fā)的樹突狀細(xì)胞炎性分化和表型變化。3丙泊酚對(duì)樹突狀細(xì)胞的影響可能與TLR4通路和(或)β1腎上腺素能受體通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2369051