【摘要】：研究背景及目的激素性股骨頭壞死(steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH)發(fā)病機制至今未明,成骨分化障礙與其密切相關。研究表明,微小RNA-206(micro RNA-206,miR-206)可下調其靶蛋白縫隙連接蛋白43(connexin43,Cx43)繼而抑制成骨細胞分化,Cx43高表達可激活Wnt經(jīng)典信號通路,促進成骨細胞分化。而miR-206靶向Cx43調控成骨分化在SANFH中的作用尚未見報道。我們假設Cx43/miR-206通過下游Wnt經(jīng)典信號通路調控成骨細胞分化在SANFH中發(fā)揮重要作用。建立SANFH動物模型,動態(tài)檢測股骨頭內成骨分化相關因子、miR-206、Cx43及Wnt經(jīng)典信號通路關鍵蛋白的表達變化,闡明miR-206靶向Cx43調控成骨分化在SANFH中的作用及潛在機制,為SANFH診療提供新靶點。方法1、健康新西蘭大白兔72只,雌雄各半,應用數(shù)字隨機法分為模型組和對照組。模型組應用內毒素(lipopolysaccharide,LPS,10mg/kg)聯(lián)合甲基強的松龍(methylprednisolone,MPS,20mg/kg)建立激素性股骨頭壞死模型;對照組于相同時間注射等量生理鹽水。兩組動物分別于造模后第2、4和8周行核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)檢查,蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色確定模型成功建立。2、應用原位雜交(in situ hybridization,ISH)和實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測兔股骨頭內miR-206表達,RT-PCR和Westernblot檢測Cx43、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相關轉錄因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、Dickkopf相關蛋白1(dickkopf-related protein 1,Dkk1)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin),免疫組織化學(immunohistochemistry,IHC)檢測Cx43表達。結果1、MRI檢查顯示模型組兔雙側股骨頭T1WI信號強度降低,呈線樣或斑點狀,T2WI呈不均勻高信號;對照組兔雙側股骨頭T1WI和T2WI未見異常信號。光鏡觀察顯示模型組兔股骨頭內骨小梁變細,甚至斷裂,脂肪細胞增多增大,空骨餡窩增加;對照組兔股骨頭內骨小梁結構完整,骨細胞清晰可見,空骨陷窩少見,脂肪細胞相對較少。模型組與對照組空骨陷窩率、脂肪細胞直徑比較,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05),模型成功建立。2、ALP染色顯示ALP主要陽性表達于骨小梁邊緣的成骨細胞,且模型組染色強度較對照組弱;RT-PCR結果顯示模型組ALP和Runx2 m RNA表達量較正常組均降低(p0.05),Western blot結果表明Runx2蛋白在模型組兔股骨頭內表達較對照組減少(p0.05)。ISH結果顯示miR-206陽性表達于髓腔、成骨細胞及少量骨細胞內,且模型組兔股骨頭內著色較對照組強。RT-PCR結果表明模型組兔股骨頭內miR-206表達較對照組增多(p0.05),且隨時間推移有上升趨勢。ICH結果顯示Cx43陽性表達于髓腔細胞及成骨細胞,且模型組兔股骨頭內Cx43染色強度較對照組弱。RT-PCR和Western blot結果表明模型組兔股骨頭內Cx43和β-catenin m RNA和蛋白均較對照組表達減少,而Dkk1蛋白和m RNA表達量較對照組明顯增多(p0.05)。結論1、應用內毒素聯(lián)合甲強龍可成功建立兔激素性股骨頭壞死模型。2、成骨分化障礙與激素性股骨頭壞死密切相關。3、miR-206可能通過下調其靶蛋白Cx43,抑制Wnt/β-catenin信號通路轉導,進而抑制成骨分化參與激素性股骨頭壞死發(fā)生發(fā)展進程。
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【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R681.8

【參考文獻】

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本文編號：2362749