【摘要】：研究背景：瘢痕疙瘩是皮膚損傷愈合后形成的一種過(guò)度增生的異常瘢痕組織,表現(xiàn)為瘢痕組織過(guò)度增生,并向周圍正常組織浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。因其具有獨(dú)特的生長(zhǎng)特性及臨床表現(xiàn),也被人們視為一種創(chuàng)傷愈合后形成的皮膚良性腫瘤。目前仍缺乏較為理想的治療方法。放療作為防止瘢痕疙瘩術(shù)后復(fù)發(fā)的治療手段,目前在臨床應(yīng)用較為廣泛。但由于瘢痕疙瘩自身具有放療抵抗,對(duì)放療不敏感,術(shù)后的復(fù)發(fā)率仍較高。乏氧被認(rèn)為是腫瘤放療不敏感的重要因素,而乏氧誘導(dǎo)因子-1則被認(rèn)為是乏氧調(diào)控的關(guān)鍵因子。我們前期的實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了瘢痕疙瘩組織中乏氧誘導(dǎo)因子高表達(dá),且在接受放療后,其表達(dá)會(huì)進(jìn)一步升高。結(jié)合腫瘤研究領(lǐng)域的發(fā)現(xiàn),我們推測(cè)瘢痕疙瘩組織中乏氧誘導(dǎo)因子-1與細(xì)胞放療的不敏感密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬要驗(yàn)證乏氧誘導(dǎo)因子-1是否是瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞放療抵抗的關(guān)鍵因子；通過(guò)乏氧誘導(dǎo)因子-1的抑制劑2ME2抑制乏氧誘導(dǎo)因子-1的表達(dá),能否提高瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞放療的敏感性。研究目的：1.驗(yàn)證乏氧誘導(dǎo)因子-1在瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中的高表達(dá)及放療后的變化。2.探討乏氧誘導(dǎo)因子-1敲除后的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及其對(duì)放療敏感性的變化。3.研究2ME2對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞放療凋亡的影響。4.初步探討2ME2對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的作用機(jī)制。研究方法：1.在常氧和乏氧兩種狀態(tài)下培養(yǎng)細(xì)胞,通過(guò)Western Blot檢測(cè)放療前后瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞HIF-1α的表達(dá)差異。2.通過(guò)慢病毒載體轉(zhuǎn)染瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞,將HIF-la基因敲除。通過(guò)CCK試劑檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)HIF-la基因敲除后的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的放射凋亡情況。3.通過(guò)用不同濃度的2ME2作用瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞24小時(shí)后,對(duì)細(xì)胞進(jìn)行放療。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的放射凋亡情況。CCK檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。4.通過(guò)用不同濃度的2ME2作用瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞24小時(shí)后,通過(guò)qRT-PCR檢測(cè)HIF-1α基因表達(dá),Western Blot檢測(cè)HIF-1α蛋白表達(dá),ELISA檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。研究結(jié)果：1.在乏氧條件下,瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)要高于常氧條件,且在接受放療后,HIF-1α蛋白表達(dá)量會(huì)進(jìn)一步升高。2.HIF-1α基因敲除后的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞對(duì)放療更為敏感,細(xì)胞的凋亡率較對(duì)照組有明顯的增加,并集中于晚期凋亡,但細(xì)胞的生長(zhǎng)情況不受影響。3.2ME2作用后的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞對(duì)放療更為敏感,細(xì)胞的放射凋亡率較對(duì)照組有明顯的增高,并集中于晚期凋亡。且隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞的放射凋亡率不斷升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng)。4.2ME2對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞HIF-la基因表達(dá)沒有明顯影響,但卻能有效的抑制HIF-1α蛋白的表達(dá)。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)2ME2對(duì)HIF-1的結(jié)構(gòu)蛋白HIF-1p的表達(dá)也沒有影響。此外,2ME2還能抑制VEGF因子的分泌。最后,2ME2還可以明顯抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng),且呈現(xiàn)一定的劑量依賴效應(yīng)。研究結(jié)論：1.HIF-1α基因敲除后的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞對(duì)放療的敏感性明顯提高。2.2ME2能夠抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞HIF-1α蛋白的表達(dá),對(duì)其基因的表達(dá)無(wú)明顯影響。3.2ME2能夠增加瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞對(duì)放療的敏感性,有效的提高細(xì)胞的放療凋亡率。同時(shí)2ME2能夠有效地抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。4.HIF-1α可作為瘢痕疙瘩治療的潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R622

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 蔣軍健;羅少軍;梁杰;;瘢痕疙瘩術(shù)后放射治療有效時(shí)機(jī)的Meta分析[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年05期

2 王慶國(guó);李曉梅;張敏;李航;溫冰;李洪振;高獻(xiàn)書;;107例瘢痕疙瘩術(shù)后兩種分割劑量放療療效分析[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

3 龍笑;曾萱;張福泉;吳興成;王曉軍;;槲皮素聯(lián)合放射線抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞膠原合成[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年03期

4 程光惠;姜德福;韓東梅;王彥琦;;瘢痕疙瘩術(shù)后放射治療的臨床分析[J];激光雜志;2006年03期

5 陳全華;彭友林;;瘢痕切除即刻局部注射曲安奈德聯(lián)合放療治療耳廓瘢痕疙瘩療效觀察[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2012年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 斯樓斌;槲皮素對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞放療增敏作用及乏氧誘導(dǎo)因子表達(dá)影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

，

本文編號(hào)：2328592