【摘要】：目的本研究采用盲腸結(jié)扎法(CLP)建立膿毒癥小鼠模型,對(duì)比觀察內(nèi)毒素組和丙泊酚治療組小鼠各時(shí)相點(diǎn)樹突狀細(xì)胞的數(shù)目、成熟度以及亞型,此外還同時(shí)檢測(cè)各時(shí)相點(diǎn)TNF-α和IL-10的水平,以綜合評(píng)估各時(shí)相點(diǎn)炎癥狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)從丙泊酚能誘導(dǎo)膿毒癥小鼠樹突細(xì)胞向調(diào)節(jié)性樹突細(xì)胞分化角度闡釋丙泊酚對(duì)膿毒癥免疫平衡的影響,以期為麻醉鎮(zhèn)靜藥物在I C U的合理應(yīng)用提供依據(jù)。方法將60只Bal B/c小鼠隨機(jī)均分為三組即假手術(shù)組(Sham組)、丙泊酚注射組(P組)和生理鹽水注射組(NS組),其中P組和NS組按盲腸結(jié)扎穿孔法制備膿毒癥小鼠模型,而假手術(shù)組僅開腹翻動(dòng)盲腸。造模成功后,生理鹽水組和丙泊酚組分別給予等量的0.9%生理鹽水和丙泊酚(按照15mg/kg計(jì)算注射量)腹腔注射,Sham組不作任何處理,所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在造模成功后的0h、6h、12h、24 h和36h處死,每個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)處死4只小鼠;在設(shè)定好的每個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)將實(shí)驗(yàn)小鼠眼球取血待后續(xù)檢測(cè)細(xì)胞因子,然后用脊髓脫頸法處死小鼠后留取脾臟,去除被膜后剪碎并研磨;收集細(xì)胞懸液加入到小鼠淋巴細(xì)胞分離液上,離心后留取中層絮狀物,緩沖液再次重懸,離心后去除多余的淋巴細(xì)胞分離液;使用DCs陰選試劑盒分選獲得DCs,通過(guò)添加抗CD11c、CD45RB磁珠選出CD11clowCD45RBhigh DCs,將純化的CD11clowCD45RBhigh DCs孵育24h,離心留取孵育液上清保存待檢測(cè)細(xì)胞因子;將獲得的DCs用PBS重懸后加入CD11c-APC、CD45RB-PE抗體標(biāo)染,CD40-FITC、CD80-FITC、CD86-FITC、I-a/e-FITC,避光孵育15min采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC亞群分化及細(xì)胞表面相關(guān)標(biāo)記物;嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫吸附試劑盒說(shuō)明書測(cè)定實(shí)驗(yàn)中涉及的細(xì)胞因子TNF-α及IL-10的濃度。結(jié)果1流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞分成了CD11chighCD45RBlowD Cs(傳統(tǒng)性樹突狀細(xì)胞)、CD11clowCD45RBhighDCs(調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞)和CD11clowCD45RBlowDCs三個(gè)亞群;2經(jīng)過(guò)同型對(duì)照流式細(xì)胞儀對(duì)調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞C D11clowCD45RBhighDCs表面分子檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)CD40、CD80、CD86和MHC-II類分子等均處于低度表達(dá)或者弱表達(dá)狀態(tài),符合CD11clowCD45RBhighDCs的不成熟特性;3與生NS組比較,0~6h時(shí)P組R1(傳統(tǒng)性樹突狀細(xì)胞CD11chighCD45RBlow DCs)和R2(調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞CD11clowCD45RBhighDCs)所占比例變化并沒有顯著變化,從12h開始,兩組中R1所占比例變化不明顯,而P組的R2比例比NS組明顯升高(P0.05),在24h~36h,P組的R2比例仍舊比NS組顯著增加(P0.05);4膿毒癥模型組小鼠血清中IL-10和TNF-α水平均較Sham組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而在經(jīng)過(guò)丙泊酚的刺激后,該組血清中TNF-α水平較NS組明顯下降同時(shí)IL-10水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);5經(jīng)Pears on直線相關(guān)性分析表明,P組CD11clowCD45RBhighDCs比例增加與孵育液中IL-10水平呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)(r=0.355,P0.05)。結(jié)論1膿毒癥早期無(wú)論是促炎因子TNF-α還是抗炎因子IL-10均有一定程度的升高,說(shuō)明此時(shí)機(jī)體免疫處于失衡狀態(tài)。2膿毒癥早期丙泊酚的應(yīng)用可以促使脾臟樹突狀細(xì)胞向調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞分化,并在一定程度上抑制細(xì)胞因子TNF-α的分泌同時(shí)增加IL-10的分泌。3丙泊酚組調(diào)節(jié)性樹突細(xì)胞比例增加與IL-10分泌量呈現(xiàn)一定的正相關(guān)性,因此我們推測(cè)丙泊酚在膿毒癥早期發(fā)揮作用可能是通過(guò)促使樹突狀細(xì)胞向調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞分化并增加負(fù)向免疫功能的細(xì)胞因子分泌水平來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2325123